| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-26页 |
| 1 昆虫抗冻蛋白的类型 | 第9-10页 |
| 2 昆虫抗冻蛋白的结构与THA | 第10-12页 |
| 3 抗冻蛋白与细胞膜的相互作用 | 第12-13页 |
| 4 抗冻蛋白与冰晶的相互作用 | 第13-14页 |
| 5 抗冻蛋白对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第14-15页 |
| 5.1 玻璃化冷冻对卵母细胞的影响 | 第14-15页 |
| 5.2 抗冻蛋白在细胞玻璃化冻存中的作用 | 第15页 |
| 6 昆虫抗冻蛋白的其他作用 | 第15-17页 |
| 7 展望 | 第17页 |
| 参考文献 | 第17-26页 |
| 第二部分 实验部分 | 第26-72页 |
| 第一章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914重复序列变化对其抗冻活性的影响 | 第26-55页 |
| 1 材料方法 | 第26-33页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 1.2 试剂 | 第27页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第27页 |
| 1.4 常用试剂配制 | 第27页 |
| 1.5 引物设计与合成 | 第27-28页 |
| 1.6 具有不同重复序列ApAFP914蛋白序列设计及基因的获得 | 第28-30页 |
| 1.7 具有不同重复序列ApAFP914s原核表达载体的构建 | 第30页 |
| 1.8 具有不同重复序列数ApAFP914s诱导表达及纯化 | 第30-31页 |
| 1.9 TrxA-ApAFP914s的SDS-PAGE电泳及Western Bolt | 第31页 |
| 1.10 ApAFP914s融合蛋白的热滞活性测定 | 第31-32页 |
| 1.11 重组ApAFP914s对大肠杆菌的低温保护作用 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-50页 |
| 2.1 具有不同重复序列数ApAFP914s的结构分析和比较 | 第33-34页 |
| 2.2 具有不同重复序列数ApAFP914s的原核表达载体构建 | 第34-37页 |
| 2.3 TrxA-ApAFP914s的表达及纯化 | 第37-40页 |
| 2.4 TrxA-ApAFP914s的Western Blot鉴定 | 第40-41页 |
| 2.5 TrxA-ApAFP914s的THA活性分析 | 第41-48页 |
| 2.6 ApAFP914s对大肠杆菌DH5α的低温保护作用 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 第二章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914及ApAFP914-C在小鼠卵母细胞玻璃化冷冻中的作用 | 第55-72页 |
| 1 材料与方法 | 第55-63页 |
| 1.1 实验动物 | 第55-56页 |
| 1.2 实验材料及试剂 | 第56-57页 |
| 1.3 主要实验工具 | 第57页 |
| 1.4 小鼠卵母细胞的获得 | 第57页 |
| 1.5 小鼠卵母细胞的玻璃化冷冻方法 | 第57-58页 |
| 1.6 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914对小鼠卵母细胞的玻璃化冷冻方法 | 第58页 |
| 1.7 台盼蓝染色法鉴定小鼠卵母细胞存活 | 第58-59页 |
| 1.8 小鼠卵母细胞的体外受精 | 第59-60页 |
| 1.9 小鼠卵母细胞m RNA的分离 | 第60页 |
| 1.10 小鼠卵母细胞c DNA的获得 | 第60-61页 |
| 1.11 荧光定量标准质粒的构建 | 第61-62页 |
| 1.12 荧光定量检测不同处理下卵母细胞基因的表达水平 | 第62-63页 |
| 2 结果 | 第63-67页 |
| 2.1 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914及ApAFP914-C对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的保护作用 | 第63-64页 |
| 2.2 小鼠卵母细胞的体外受精 | 第64页 |
| 2.3 gapdh、sod1、mad2及eg5基因的标准曲线及扩增效率 | 第64-65页 |
| 2.4 ApAFP914及ApAFP914-C对玻璃化冻存小鼠卵细胞基因表达的影响 | 第65-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第72-74页 |
| 第四部分 附录 | 第74-75页 |
| 常用仪器设备 | 第74-75页 |
| 个人简介 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
