| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 1.材料与仪器 | 第13-16页 |
| 1.1 实验材料 | 第13页 |
| 1.2 实验仪器 | 第13-14页 |
| 1.3 主要溶液及试剂配制 | 第14-16页 |
| 2. 方法 | 第16-27页 |
| 2.1 从人大肠癌组织总 RNA 的制备 | 第16页 |
| 2.2 PCR 扩增目的片段 | 第16-18页 |
| 2.3 DNA 片段的纯化、回收 | 第18页 |
| 2.4 细菌感受态的制备及质粒的转化 | 第18-19页 |
| 2.5 质粒的提取和纯化 | 第19-21页 |
| 2.6 重组原核表达载体的构建、筛选和鉴定 | 第21-22页 |
| 2.7 DNA 序列测定 | 第22页 |
| 2.8 重组质粒pET-156/VEGF_(165) 转化入表达工程菌Bl-21(DE3) | 第22页 |
| 2.9 VEGF_(165) 融合蛋白的表达及鉴定 | 第22-24页 |
| 2.10 VEGF_(165) 融合蛋白表达条件的优化 | 第24页 |
| 2.11 VEGF_(165) 融合蛋白的表达部位鉴定 | 第24页 |
| 2.12 细菌收集与包涵体的提取 | 第24-25页 |
| 2.13 包涵体的洗涤与溶解 | 第25页 |
| 2.14 包涵体的复性 | 第25页 |
| 2.15 融合蛋白的His Sepharose 亲和层析 | 第25-26页 |
| 2.16 纯化融合蛋白的Western-blot 鉴定 | 第26-27页 |
| 3. 结果 | 第27-39页 |
| 3.1 大肠癌组织总 RNA 的制备 | 第27页 |
| 3.2 VEGF_(165) 基因 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| 3.3 重组表达载体 pET-15b/VEGF165 的双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 3.4 重组表达载体目的基因的测序鉴定 | 第29-32页 |
| 3.5 重组菌BL21/pET-15b/VEGF165的诱导表达 | 第32-35页 |
| 3.6 包涵体的分离、洗涤和溶解 | 第35-36页 |
| 3.7 VEGF_(165)融合蛋白的分离纯化 | 第36-39页 |
| 4.讨论 | 第39-44页 |
| 4.1 pET-15b/VEGF_(165) 融合基因的构建策略 | 第39页 |
| 4.2 表达载体的选择及构建 | 第39-40页 |
| 4.3 VEGF_(165) 融合蛋白的表达及优化 | 第40-41页 |
| 4.4 VEGF_(165) 融合蛋白表达形式的鉴定 | 第41页 |
| 4.5 包涵体蛋白的提取 | 第41-42页 |
| 4.6 包涵体的变性与复性 | 第42-43页 |
| 4.7 融合蛋白的亲和层析 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 综述 | 第50-59页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
