| 内容提要 | 第4-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-30页 |
| 1.1 肿瘤的基因治疗 | 第8-9页 |
| 1.2 CDK4的结构特征及其调控机制 | 第9-17页 |
| 1.2.1 细胞周期与CDKs家族 | 第9-11页 |
| 1.2.2 CDK4及CyclinD1分子特征 | 第11-12页 |
| 1.2.3 CDK4/CyclinD1复合物的结构特征 | 第12-15页 |
| 1.2.4 CDK4对细胞周期的调控 | 第15-17页 |
| 1.3 单链抗体与肿瘤的基因治疗 | 第17-19页 |
| 1.3.1 单链抗体的发展及其优点 | 第17-18页 |
| 1.3.2 单链抗体与肿瘤的基因治疗 | 第18-19页 |
| 1.4 抗原表位(Antigenic epitope) | 第19-28页 |
| 1.4.1 抗原表位的定义及种类 | 第19-20页 |
| 1.4.2 抗原表位的分析方法 | 第20-22页 |
| 1.4.3 噬菌体展示技术 | 第22-24页 |
| 1.4.4 构象表位预测 | 第24-28页 |
| 1.5 本研究立题目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 实验研究 | 第30-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-36页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第30-32页 |
| 2.1.3 各种溶液的配制 | 第32-35页 |
| 2.1.4 计算机生物软件 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-45页 |
| 2.2.1 重组人CDK4蛋白的制备 | 第36页 |
| 2.2.2 抗CDK4单链抗体的可溶性表达与纯化 | 第36-38页 |
| 2.2.3 环七肽库筛选与抗CDK4抗体结合的小肽 | 第38-41页 |
| 2.2.4 环七肽序列的确定 | 第41-43页 |
| 2.2.5 测定并分析小肽序列 | 第43页 |
| 2.2.6 计算机模拟蛋白质分子对接 | 第43-45页 |
| 第三章 实验结果 | 第45-61页 |
| 3.1 重组人CDK4抗原分子纯化及结合活性验证 | 第45页 |
| 3.2 抗CDK4单链抗体的纯化及结合活性验证 | 第45-47页 |
| 3.2.1 ELISA法检测抗CDK4单链抗体的活性 | 第45-46页 |
| 3.2.2 抗CDK4单链抗体的诱导表达、纯化 | 第46页 |
| 3.2.3 ELISA法检测纯化的抗CDK4单链抗体活性 | 第46-47页 |
| 3.3 环七肽库的筛选结合单链抗体的小肽 | 第47-53页 |
| 3.3.1 噬菌体的回收率 | 第47-48页 |
| 3.3.2 筛选得到的阳性克隆的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 噬菌体阳性克隆的序列测定及分析 | 第49-51页 |
| 3.3.4 计算机模拟蛋白分子结构以及分子对接 | 第51-53页 |
| 附图 | 第53-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-67页 |
| 4.1 重组人CDK4抗原蛋白的制备 | 第61页 |
| 4.2 抗CDK4单链抗体的制备 | 第61-62页 |
| 4.3 抗CDK4单链抗体识别的CDK4的模拟表位的筛选 | 第62-64页 |
| 4.4 蛋白质三维结构模拟以及分子对接 | 第64-67页 |
| 第五章 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 中文摘要 | 第77-80页 |
| Abstract | 第80-81页 |
| 致谢 | 第82页 |
