| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| 1 布鲁氏菌病的研究概况 | 第9-10页 |
| 1.1 布鲁氏菌病病原 | 第9页 |
| 1.2 布鲁氏菌病发病机理的研究 | 第9-10页 |
| 1.3 布鲁氏菌病诊断方法的研究 | 第10页 |
| 1.4 展望 | 第10页 |
| 2 B-LPS的研究 | 第10-14页 |
| 2.1 B-LPS结构 | 第10-13页 |
| 2.2 B-LPS的功能 | 第13-14页 |
| 3 Caspases与细胞凋亡的研究 | 第14-18页 |
| 3.1 Caspases的发现 | 第14-15页 |
| 3.2 Caspases家族及分类 | 第15页 |
| 3.3 Caspases结构 | 第15-16页 |
| 3.4 Caspases的激活及调控 | 第16-18页 |
| 3.5 caspases的抑制 | 第18页 |
| 4 RNA干扰(RNAi)技术 | 第18-20页 |
| 4.1 RNAi作用机制 | 第18-19页 |
| 4.2 RNAi的发现及应用 | 第19-20页 |
| 4.3 展望 | 第20页 |
| 5 细胞因子 | 第20-22页 |
| 5.1 肿瘤坏死因子-α研究进展 | 第20页 |
| 5.2 白细胞介素-1β的研究进展 | 第20-21页 |
| 5.3 展望 | 第21-22页 |
| 第二章 三个重要LipidA编码基因的克隆、表达及生物信息学分析 | 第22-43页 |
| 1 前言 | 第22-23页 |
| 2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1 菌株、质粒及感受态细胞 | 第23页 |
| 2.2 主要试剂及配制 | 第23-26页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 3 实验方法 | 第26-34页 |
| 3.1 设计引物 | 第26-27页 |
| 3.2 基因PCR扩增及纯化 | 第27-28页 |
| 3.3 目的基因的克隆 | 第28-30页 |
| 3.4 目的基因的原核表达 | 第30-33页 |
| 3.5 生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-41页 |
| 4.1 PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| 4.2 重组质粒酶切结果 | 第35页 |
| 4.3 测序结果 | 第35-36页 |
| 4.4 SDS-PAGE结果 | 第36-38页 |
| 4.5 Western blot鉴定结果 | 第38-39页 |
| 4.6 生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 5 讨论 | 第41-43页 |
| 5.1 布鲁氏菌M5-90株基因组的提取 | 第41页 |
| 5.2 PCR技术的应用 | 第41-42页 |
| 5.3 LipidA生物合成相关基因 | 第42-43页 |
| 第三章 B-LPS刺激对RAW264.7细胞Casp4表达及IL-1β、TNF-α分泌的影响 | 第43-63页 |
| 1 前言 | 第43-44页 |
| 2 实验材料 | 第44-48页 |
| 2.1 实验细胞 | 第44页 |
| 2.2 主要试剂及试剂配制 | 第44-48页 |
| 2.3 主要仪器 | 第48页 |
| 3 试验方法 | 第48-56页 |
| 3.1 B.melitensis M5-90的培养及B-LPS的提取和银染鉴定 | 第48-51页 |
| 3.2 RAW264.7细胞的培养及B-LPS刺激 | 第51-53页 |
| 3.3 Western blot检测Casp4蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3.4 ELISA检测IL-1β和TNF-α的分泌情况 | 第54-55页 |
| 3.5 数据分析 | 第55-56页 |
| 4 结果与分析 | 第56-62页 |
| 4.1 银染结果 | 第56-57页 |
| 4.2 B-LPS刺激RAW264.7细胞的形态变化 | 第57-58页 |
| 4.3 B-LPS刺激条件下RAW264.7细胞Casp4蛋白的表达 | 第58-60页 |
| 4.4 B-LPS刺激条件下RAW264.7细胞IL-1β和TNF-α的分泌情况 | 第60-62页 |
| 5 讨论 | 第62-63页 |
| 5.1 LPS的提取 | 第62页 |
| 5.2 细胞因子检测方法的选择 | 第62-63页 |
| 第四章 B-LPS刺激条件下Casp4 knockdown对RAW264.7细胞IL-1β和TNF-α分泌的影响 | 第63-72页 |
| 1 引言 | 第63页 |
| 2 实验材料 | 第63页 |
| 2.1 实验细胞 | 第63页 |
| 2.2 主要试剂 | 第63页 |
| 3 实验方法 | 第63-67页 |
| 3.1 转染条件的优化 | 第63-65页 |
| 3.2 B-LPS刺激条件下siRNA转染RAW264.7细胞 | 第65-66页 |
| 3.3 数据分析 | 第66-67页 |
| 4 结果与分析 | 第67-71页 |
| 4.1 siRNA转染条件优化结果 | 第67-69页 |
| 4.2 B-LPS刺激条件下Casp4 knockdown对IL-1β分泌的影响 | 第69-70页 |
| 4.3 B-LPS刺激条件下Casp4 knockdown对TNF-α分泌的影响 | 第70-71页 |
| 5 讨论 | 第71-72页 |
| 5.1 刺激条件的选择 | 第71页 |
| 5.2 B-LPS刺激与转染 | 第71-72页 |
| 第五章 全文总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
