| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-35页 |
| ·链霉菌简介及其基因组概述 | 第14-16页 |
| ·抗生素生物合成基因簇的克隆策略 | 第16-18页 |
| ·产生菌阻断突变体互补克隆 | 第16页 |
| ·将目的基因直接克隆到标准宿主菌 | 第16页 |
| ·利用已知的抗生素生物合成基因作探针从基因组文库中筛选同源基因 | 第16页 |
| ·利用人工合成寡核苷酸探测基因文库 | 第16-17页 |
| ·通过克隆抗生素耐药性基因得到生物合成基因 | 第17页 |
| ·利用突变克隆分析生物合成基因 | 第17页 |
| ·利用“自身克隆”或克隆到与该产生菌密切相关的宿主中 | 第17-18页 |
| ·利用转座子克隆基因 | 第18页 |
| ·基因组文库构建策略 | 第18-24页 |
| ·pBR322 和pUC | 第18-19页 |
| ·λ噬菌体载体 | 第19-20页 |
| ·酵母人工染色体载体（YAC） | 第20-21页 |
| ·细菌人工染色体（BAC) | 第21-22页 |
| ·Cosmid 载体（柯斯载体） | 第22-23页 |
| ·Fosmid 载体 | 第23-24页 |
| ·抗生素生物合成基因研究进展 | 第24-33页 |
| ·氨基糖苷类抗生素生物合成基因研究 | 第24-26页 |
| ·非核糖体含硫多肽类抗生素生物合成基因研究 | 第26-27页 |
| ·核苷类抗生素生物合成基因研究 | 第27-30页 |
| ·聚酮类抗生素生物合成基因研究 | 第30-33页 |
| ·武夷菌素的研究概况 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 武夷菌素产生菌基因组文库的构建 | 第35-43页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·酶和试剂 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·武夷菌素产生菌CK-15 基因组DNA 的制备 | 第36-37页 |
| ·最适酶切条件的确定 | 第37页 |
| ·基因组的大量酶切及酶切片段的回收 | 第37页 |
| ·载体与酶切片段的连接 | 第37页 |
| ·连接产物的包装及转染 | 第37页 |
| ·文库质量鉴定 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·CK-15 基因组DNA 的制备 | 第37-38页 |
| ·最适酶切条件的确定 | 第38-39页 |
| ·酶切及回收 | 第39-40页 |
| ·文库质量的鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 基因组文库的筛选 | 第43-52页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·菌株、酶和试剂 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·武夷菌素产生菌CK-15 基因组DNA 的制备 | 第43-44页 |
| ·文库特异性引物的设计 | 第44-46页 |
| ·引物序列与PCR 反应体系、PCR 反应程序 | 第44-45页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第45页 |
| ·纯化后DNA 片段连接到T 载体 | 第45页 |
| ·酶切验证插入片段 | 第45-46页 |
| ·基因组文库筛选 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·不吸水链霉菌武夷变种基因组制备 | 第46-47页 |
| ·文库特异性引物的筛选 | 第47-49页 |
| ·基因组文库的筛选 | 第49-50页 |
| ·阳性板的获得 | 第49页 |
| ·阳性排的获得 | 第49-50页 |
| ·以单个质粒进行扩增 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 武夷菌素生物合成基因簇序列分析 | 第52-64页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·菌株和质粒 | 第52页 |
| ·培养基和试剂 | 第52-53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·2E4 阳性克隆Fosmid 质粒的制备 | 第53页 |
| ·亚克隆及测序 | 第53-54页 |
| ·对测序结果进行生物信息学分析 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-62页 |
| ·阳性克隆插入片段序列的ORF 识别 | 第54页 |
| ·ORF 功能分析 | 第54-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 武夷菌素产生菌阻断突变株的筛选及分析 | 第64-72页 |
| ·材料与方法 | 第64-66页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·供试菌株、培养基和试剂 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64-65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·单孢子悬浮液的制备与稀释倍数的确定 | 第65页 |
| ·菌株诱变 | 第65页 |
| ·亚硝基胍（NTG）诱变 | 第65页 |
| ·氯化锂（LiCl）诱变 | 第65页 |
| ·微波诱变 | 第65页 |
| ·NTG 和LiCl 复合诱变 | 第65页 |
| ·菌株筛选 | 第65-66页 |
| ·琼脂块初筛 | 第65-66页 |
| ·摇瓶发酵复筛 | 第66页 |
| ·突变株遗传稳定性测定 | 第66页 |
| ·突变株的形态学、培养特征的观察和抑菌谱测定 | 第66页 |
| ·发酵液的HPLC 分析 | 第66页 |
| ·数据处理 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-71页 |
| ·单孢子悬浮液稀释倍数的确定 | 第66-67页 |
| ·不同诱变方法对CK-15 的诱变效果 | 第67-68页 |
| ·亚硝基胍对CK-15 的诱变效果 | 第67-68页 |
| ·氯化锂、微波单一诱变及氯化锂和亚硝基胍复合诱变对 CK-15 的诱变效果 | 第68页 |
| ·突变株N1 的遗传稳定性测定 | 第68-69页 |
| ·突变株形态学和培养特征分析 | 第69页 |
| ·突变株的抑菌谱测定 | 第69-70页 |
| ·突变株发酵液的HPLC 分析 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| 第六章 全文结论和展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
