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哈茨木霉Th-33ThChsC基因的克隆及功能初步分析

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
第一章 文献综述第13-28页
   ·木霉菌防治植物病害的机制第13-14页
     ·拮抗作用第13页
     ·竞争作用第13-14页
     ·重寄生作用第14页
     ·诱导抗性第14页
   ·木霉菌防治植物病害的范围第14-15页
   ·木霉制剂的种类第15页
   ·几丁质合成酶及其基因的分类第15-16页
   ·几丁质合成酶的功能研究第16-17页
   ·生物信息学在真菌基因功能研究中的应用第17页
     ·核酸/氨基酸序列数据库的比对和分析第17页
     ·蛋白质结构数据库的检索与功能预测第17页
   ·基因表达与调控的研究策略第17-18页
     ·差减杂交(subtractive hybridization SH)第17-18页
     ·mRNA 差异显示和限制性差异显示第18页
   ·基因功能的研究策略第18-26页
     ·转座子标签技术第18-19页
     ·T-DNA 标签技术第19页
     ·酵母双杂交技术第19页
     ·双分子荧光互补技术第19页
     ·微阵列技术第19-20页
     ·超表达技术第20页
     ·RNAi 技术(RNA interference, RNAi)第20-23页
       ·RNA 干扰技术的发现第20-21页
       ·RNA 干扰的作用机制第21-22页
       ·RNA 干扰技术的技术路线第22-23页
       ·RNAi 技术的特点第23页
     ·基因敲除技术第23-26页
       ·基因打靶技术的技术路线第23-26页
       ·基因敲除的作用特点第26页
   ·本实验的研究目的意义、内容及技术路线第26-28页
     ·本研究的目的意义第26页
     ·本研究的主要内容第26-27页
     ·本研究的技术路线第27-28页
第二章 哈茨木霉几丁质合成酶基因ThChsC 的克隆第28-44页
   ·材料与方法第28-35页
     ·试剂第28页
     ·菌株第28页
     ·培养基及主要试剂配方第28-29页
     ·引物第29-31页
     ·木霉基因组DNA 的提取第31-32页
     ·几丁质合成酶基因的克隆第32-35页
     ·几丁质合成酶基因全长序列的生物信息学分析第35页
   ·结果与分析第35-42页
     ·几丁质合成酶基因片段的获得第35页
     ·几丁质合成酶基因全长序列的获得及验证第35-37页
     ·几丁质合成酶基因全长序列的生物信息学分析第37-42页
 3 讨论第42-44页
第三章 几丁质合成酶基因ThChsC 敲除打靶载体的构建第44-52页
   ·材料与方法第45-48页
     ·试剂第45页
     ·菌株和质粒第45页
     ·几丁质合成酶基因ThChsC 侧翼序列的获得第45-46页
     ·潮霉素基因表达盒的获得第46页
     ·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 的构建第46-47页
     ·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 的分子生物学检测第47-48页
   ·结果与分析第48-50页
     ·几丁质合成酶基因ThChsC 侧翼序列的获得第48-49页
     ·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 的构建第49-50页
   ·讨论第50-52页
第四章 根癌农杆菌介导的哈茨木霉Th-33 转化第52-61页
   ·材料与方法第52-55页
     ·试剂第52页
     ·菌株第52页
     ·培养基第52-53页
     ·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 转化根癌农杆菌第53页
     ·根癌农杆菌介导双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 转化哈茨木霉Th-33第53页
     ·假定转化子的遗传稳定性分析第53-54页
     ·假定转化子的分子生物学验证第54-55页
   ·结果与分析第55-60页
     ·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 转化根癌农杆菌第55页
     ·假定转化子的获得及其稳定性分析第55-56页
     ·假定转化子的分子生物学验证第56-60页
   ·讨论第60-61页
第五章 突变株的表型分析第61-65页
   ·材料与方法第61-62页
     ·试剂第61页
     ·菌株第61页
     ·突变株生长速率和产分生孢子数量的检测第61页
     ·突变株的荧光染色观察第61-62页
     ·突变株的菌丝和分生孢子器形态观察第62页
   ·结果与分析第62-64页
     ·突变株生长速率和产分生孢子数量的检测第62页
     ·突变株的荧光染色观察第62页
     ·突变株的菌丝和分生孢子器形态观察第62-64页
   ·讨论第64-65页
第六章 全文总结第65-66页
参考文献第66-72页
致谢第72-73页
作者简介第73页

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