摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-28页 |
·木霉菌防治植物病害的机制 | 第13-14页 |
·拮抗作用 | 第13页 |
·竞争作用 | 第13-14页 |
·重寄生作用 | 第14页 |
·诱导抗性 | 第14页 |
·木霉菌防治植物病害的范围 | 第14-15页 |
·木霉制剂的种类 | 第15页 |
·几丁质合成酶及其基因的分类 | 第15-16页 |
·几丁质合成酶的功能研究 | 第16-17页 |
·生物信息学在真菌基因功能研究中的应用 | 第17页 |
·核酸/氨基酸序列数据库的比对和分析 | 第17页 |
·蛋白质结构数据库的检索与功能预测 | 第17页 |
·基因表达与调控的研究策略 | 第17-18页 |
·差减杂交(subtractive hybridization SH) | 第17-18页 |
·mRNA 差异显示和限制性差异显示 | 第18页 |
·基因功能的研究策略 | 第18-26页 |
·转座子标签技术 | 第18-19页 |
·T-DNA 标签技术 | 第19页 |
·酵母双杂交技术 | 第19页 |
·双分子荧光互补技术 | 第19页 |
·微阵列技术 | 第19-20页 |
·超表达技术 | 第20页 |
·RNAi 技术(RNA interference, RNAi) | 第20-23页 |
·RNA 干扰技术的发现 | 第20-21页 |
·RNA 干扰的作用机制 | 第21-22页 |
·RNA 干扰技术的技术路线 | 第22-23页 |
·RNAi 技术的特点 | 第23页 |
·基因敲除技术 | 第23-26页 |
·基因打靶技术的技术路线 | 第23-26页 |
·基因敲除的作用特点 | 第26页 |
·本实验的研究目的意义、内容及技术路线 | 第26-28页 |
·本研究的目的意义 | 第26页 |
·本研究的主要内容 | 第26-27页 |
·本研究的技术路线 | 第27-28页 |
第二章 哈茨木霉几丁质合成酶基因ThChsC 的克隆 | 第28-44页 |
·材料与方法 | 第28-35页 |
·试剂 | 第28页 |
·菌株 | 第28页 |
·培养基及主要试剂配方 | 第28-29页 |
·引物 | 第29-31页 |
·木霉基因组DNA 的提取 | 第31-32页 |
·几丁质合成酶基因的克隆 | 第32-35页 |
·几丁质合成酶基因全长序列的生物信息学分析 | 第35页 |
·结果与分析 | 第35-42页 |
·几丁质合成酶基因片段的获得 | 第35页 |
·几丁质合成酶基因全长序列的获得及验证 | 第35-37页 |
·几丁质合成酶基因全长序列的生物信息学分析 | 第37-42页 |
3 讨论 | 第42-44页 |
第三章 几丁质合成酶基因ThChsC 敲除打靶载体的构建 | 第44-52页 |
·材料与方法 | 第45-48页 |
·试剂 | 第45页 |
·菌株和质粒 | 第45页 |
·几丁质合成酶基因ThChsC 侧翼序列的获得 | 第45-46页 |
·潮霉素基因表达盒的获得 | 第46页 |
·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 的构建 | 第46-47页 |
·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 的分子生物学检测 | 第47-48页 |
·结果与分析 | 第48-50页 |
·几丁质合成酶基因ThChsC 侧翼序列的获得 | 第48-49页 |
·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 的构建 | 第49-50页 |
·讨论 | 第50-52页 |
第四章 根癌农杆菌介导的哈茨木霉Th-33 转化 | 第52-61页 |
·材料与方法 | 第52-55页 |
·试剂 | 第52页 |
·菌株 | 第52页 |
·培养基 | 第52-53页 |
·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 转化根癌农杆菌 | 第53页 |
·根癌农杆菌介导双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 转化哈茨木霉Th-33 | 第53页 |
·假定转化子的遗传稳定性分析 | 第53-54页 |
·假定转化子的分子生物学验证 | 第54-55页 |
·结果与分析 | 第55-60页 |
·双元打靶载体pDHt/ThChsC::hph 转化根癌农杆菌 | 第55页 |
·假定转化子的获得及其稳定性分析 | 第55-56页 |
·假定转化子的分子生物学验证 | 第56-60页 |
·讨论 | 第60-61页 |
第五章 突变株的表型分析 | 第61-65页 |
·材料与方法 | 第61-62页 |
·试剂 | 第61页 |
·菌株 | 第61页 |
·突变株生长速率和产分生孢子数量的检测 | 第61页 |
·突变株的荧光染色观察 | 第61-62页 |
·突变株的菌丝和分生孢子器形态观察 | 第62页 |
·结果与分析 | 第62-64页 |
·突变株生长速率和产分生孢子数量的检测 | 第62页 |
·突变株的荧光染色观察 | 第62页 |
·突变株的菌丝和分生孢子器形态观察 | 第62-64页 |
·讨论 | 第64-65页 |
第六章 全文总结 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
作者简介 | 第73页 |