| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1. 嗜水气单胞菌的特性 | 第12-13页 |
| 2. 主要保护性抗原在水产养殖动物致病菌中的研究现状 | 第13-17页 |
| 3. 鱼用疫苗的研究状况 | 第17-20页 |
| 4. 研究内容及意义 | 第20页 |
| 第二章 嗜水气单胞菌外膜蛋白的组成及特异性外膜蛋白的筛选 | 第20-29页 |
| 1. 实验材料 | 第20-21页 |
| 2. 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.1 嗜水气单胞菌外膜蛋白的提取 | 第21-22页 |
| 2.2 各分离蛋白分子质量的分析 | 第22页 |
| 2.3 欧洲鳗鲡感染嗜水气单胞菌全菌后恢复期血清的制备 | 第22-23页 |
| 2.4 兔抗嗜水气单胞菌外膜蛋白血清的制备 | 第23页 |
| 2.5 Western-blot | 第23-24页 |
| 2.6 质谱测序 | 第24页 |
| 3. 结果与分析 | 第24-28页 |
| 3.1 血清效价和外膜蛋白含量 | 第24页 |
| 3.2 菌株外膜蛋白的SDS-PAGE图谱 | 第24-25页 |
| 3.3 菌株322A与其他菌株外膜蛋白电泳图谱的比较 | 第25-26页 |
| 3.4 欧洲鳗鲡恢复期血清和兔抗322A外膜蛋白血清对外膜蛋白的Western-blot印迹 | 第26-28页 |
| 3.5 质谱测序结果 | 第28页 |
| 4. 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 嗜水气单胞菌ompF和ompK的原核表达 | 第29-47页 |
| 1. 实验材料 | 第29-30页 |
| 2. 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.1 嗜水气单胞菌ompF和ompK的克隆 | 第30-32页 |
| 2.1.1 引物的设计 | 第30页 |
| 2.1.2 嗜水气单胞菌总DNA的提取 | 第30页 |
| 2.1.3 基因扩增以及双酶切产物的获得 | 第30-31页 |
| 2.1.4 重组质粒的PCR验证 | 第31页 |
| 2.1.5 重组质粒的双酶切验证 | 第31-32页 |
| 2.1.6 重组质粒的测序验证 | 第32页 |
| 2.2 嗜水气单胞菌ompF和ompK的原核表达 | 第32-35页 |
| 2.2.1 PCR产物与载体片段的连接 | 第32页 |
| 2.2.2 制备感受态细胞 | 第32-33页 |
| 2.2.3 感受态细胞的化学转化以及蓝白斑筛选 | 第33页 |
| 2.2.4 重组质粒的PCR验证 | 第33页 |
| 2.2.5 重组质粒的双酶切验证 | 第33页 |
| 2.2.6 重组质粒的测序验证 | 第33-34页 |
| 2.2.7 重组质粒的诱导表达和纯化 | 第34页 |
| 2.2.8 重组蛋白的免疫印迹 | 第34-35页 |
| 3. 结果与分析 | 第35-46页 |
| 3.1 嗜水气单胞菌ompF和ompK的克隆分析 | 第35-40页 |
| 3.1.1 设计的引物 | 第35页 |
| 3.1.2 目的基因的PCR结果扩增 | 第35-37页 |
| 3.1.3 重组质粒的酶切验证 | 第37-38页 |
| 3.1.4 重组质粒的PCR验证 | 第38-39页 |
| 3.1.5 重组质粒的测序验证 | 第39-40页 |
| 3.2 嗜水气单胞菌ompF和ompK的原核表达分析 | 第40-46页 |
| 3.2.1 目的基因的扩增 | 第40-41页 |
| 3.2.2 ompF和ompK原核表达载体的构建和双酶切验证 | 第41-42页 |
| 3.2.3 重组质粒的PCR验证 | 第42-43页 |
| 3.2.4 重组质粒的测序验证 | 第43页 |
| 3.2.5 重组蛋白ompF和ompK的诱导表达和纯化 | 第43-45页 |
| 3.2.6 重组蛋白的免疫印迹 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 重组蛋白r-ompF和r-ompK对欧洲鳗鲡的免疫保护作用 | 第47-64页 |
| 1. 实验材料 | 第47-48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-52页 |
| 2.1 重组蛋白浓度的测定 | 第48页 |
| 2.2 重组蛋白对欧洲鳗鲡的免疫 | 第48页 |
| 2.3 采样和攻毒 | 第48-49页 |
| 2.4 设计欧洲鳗鲡三个免疫相关基因和内参基因的引物 | 第49页 |
| 2.5 三种免疫相关基因的Real-time PCR | 第49-52页 |
| 3. 结果与分析 | 第52-61页 |
| 3.1 血清效价 | 第52页 |
| 3.2 引物的设计 | 第52页 |
| 3.3 重组蛋白的浓度 | 第52-53页 |
| 3.4 重组蛋白对实验鱼的免疫保护率 | 第53-54页 |
| 3.5 肝脏组织RNA的检测 | 第54页 |
| 3.6 引物可行性的检测 | 第54-55页 |
| 3.7 荧光定量PCR的扩增效率检测结果 | 第55-58页 |
| 3.8 荧光定量PCR的检测结果 | 第58-61页 |
| 4. 讨论 | 第61-64页 |
| 4.1 重组蛋白的抗血清效价分析 | 第61页 |
| 4.2 重组蛋白对欧洲鳗鲡的免疫保护率 | 第61-62页 |
| 4.3 Real-time PCR的检测 | 第62-64页 |
| 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 基金项目 | 第78-79页 |
| 已发表文章 | 第79页 |
