| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 茯苓三萜类物质研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.1 茯苓栽培概述 | 第11页 |
| 1.1.2 茯苓的药理活性概述 | 第11-12页 |
| 1.1.3 茯苓的化学成分 | 第12-13页 |
| 1.1.4 关于茯苓三萜类生物合成概述 | 第13-14页 |
| 1.2 甾醇C-24 甲基转移酶研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 茯苓酸研究进展 | 第14页 |
| 1.2.2 萜类骨架的生物合成代谢概述 | 第14-15页 |
| 1.2.3 甾醇C-24 甲基转移酶研究概述 | 第15-16页 |
| 1.3 研究意义与技术路线 | 第16-18页 |
| 1.3.1 研究意义 | 第16-17页 |
| 1.3.2 本研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 2 茯苓SMT1基因的克隆与序列分析 | 第18-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.5 核酸提取 | 第19-20页 |
| 2.1.6 用于 3’RACE扩增cDNA的合成 | 第20-21页 |
| 2.1.7 用于 5’RACE扩增cDNA的合成 | 第21页 |
| 2.1.8 SMT13’RACE的扩增 | 第21-26页 |
| 2.1.9 SMT15’RACE的扩增 | 第26-29页 |
| 2.1.10 SMT1基因全长扩增 | 第29-30页 |
| 2.1.11 SMT1基因组序列获得 | 第30-31页 |
| 2.1.12 SMT1基因生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-45页 |
| 2.2.1 茯苓中总RNA提取和纯度检测 | 第32页 |
| 2.2.2 SMT1基因的分子克隆 | 第32-34页 |
| 2.2.3 SMT1基因结构与启动子分析 | 第34-37页 |
| 2.2.4 SMT1蛋白质系统发育分析 | 第37-38页 |
| 2.2.5 SMT1蛋白质理化性质预测分析 | 第38-42页 |
| 2.2.6 SMT1蛋白质 3D结构模拟与功能分析 | 第42-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-46页 |
| 3 茯苓SMT1原核表达及体外酶活验证 | 第46-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第46页 |
| 3.1.2 主要试剂、耗材 | 第46-47页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第47页 |
| 3.1.4 原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.1.5 蛋白表达 | 第48-49页 |
| 3.1.6 SMT1功能的体外酶促反应验证 | 第49页 |
| 3.2 结果与分析 | 第49-53页 |
| 3.2.1 SMT1蛋白的表达 | 第49-51页 |
| 3.2.2 体外重组SMT1的酶促活性 | 第51-53页 |
| 3.3 讨论 | 第53-55页 |
| 4 茯苓甾醇转甲基酶在茯苓体内的表达情况 | 第55-60页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第55页 |
| 4.1.2 试剂、耗材 | 第55页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第55页 |
| 4.1.4 荧光定量 | 第55-58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-60页 |
| 5 结论与展望 | 第60-62页 |
| 5.1 结论 | 第60页 |
| 5.2 展望 | 第60-61页 |
| 5.3 本文创新点 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-77页 |
| 附录A 实验中用到的引物 | 第70-72页 |
| 附录B SMT1的基因组序列和CDS序列 | 第72-74页 |
| 附录C 本研究中所使用培养基、试剂配方 | 第74-76页 |
| 附录D 攻读硕士学位期间主要学术成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |