| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写 | 第10-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 真核生物的基因表达调控 | 第14-18页 |
| 1.1.1 真核生物的基因组结构 | 第14页 |
| 1.1.2 表观遗传调控 | 第14-17页 |
| 1.1.3 先锋转录因子 | 第17-18页 |
| 1.2 干细胞概述 | 第18-23页 |
| 1.2.1 胚胎干细胞分类 | 第19页 |
| 1.2.2 维持ES细胞多能性与自我更新的转录调控机制 | 第19-21页 |
| 1.2.3 胚胎干细胞分化 | 第21-22页 |
| 1.2.4 细胞重编程和诱导多能性干细胞 | 第22-23页 |
| 1.3 转录因子FOXA1 | 第23-26页 |
| 1.3.1 FoxA1基因与蛋白结构 | 第24-25页 |
| 1.3.2 FoxA1的生物学功能 | 第25-26页 |
| 1.4 本文研究背景及内容 | 第26-28页 |
| 第2章 Nanog在RA诱导的P19细胞分化过程中被沉默 | 第28-47页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第29-31页 |
| 2.2.1 细胞 | 第29页 |
| 2.2.2 其他材料和试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-43页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第31-33页 |
| 2.3.2 总RNA提取及逆转录 | 第33-35页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR及半定量PCR | 第35-36页 |
| 2.3.4 Western Blotting（WB） | 第36-39页 |
| 2.3.5 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 第39-41页 |
| 2.3.6 DNA甲基化检测（亚硫酸氢盐测序法） | 第41-43页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第43-45页 |
| 2.4.1 RA诱导下调Nanog基因表达 | 第43-44页 |
| 2.4.2 RA诱导改变Nanog基因组蛋白修饰状态 | 第44-45页 |
| 2.4.3 RA诱导引起Nanog基因启动子甲基化 | 第45页 |
| 2.5 小结 | 第45-47页 |
| 第3章 FoxA1和Grg3影响Nanog基因表达下调 | 第47-59页 |
| 3.1 前言 | 第47-48页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第48-49页 |
| 3.2.1 细胞 | 第48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第48-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-54页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第49页 |
| 3.3.2 逆转录及荧光定量PCR | 第49页 |
| 3.3.3 Western Blotting | 第49页 |
| 3.3.4 染色质免疫共沉淀 | 第49-50页 |
| 3.3.5 FoxAl表达质粒的构建 | 第50-53页 |
| 3.3.6 细胞转染 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 3.4.1 FoxA1和Grg3在P19细胞分化过程中的表达水平检测 | 第54-55页 |
| 3.4.2 FoxA1和Grg3内源性结合于Nanog基因远端启动子 | 第55页 |
| 3.4.3 重组质粒pcDNA3.1-FoxA1-His质粒的构建 | 第55-56页 |
| 3.4.4 P19细胞中外源表达FoxA1抑制Nanog基因表达 | 第56-57页 |
| 3.4.5 P19细胞分化过程中干扰FoxA1或Grg3延缓Nanog表达下调 | 第57页 |
| 3.5 小结 | 第57-59页 |
| 第4章 FOXA1募集Grg3并抑制Nanog启动子活性 | 第59-70页 |
| 4.1 前言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第59-60页 |
| 4.2.1 细胞 | 第59页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第60页 |
| 4.3 实验方法 | 第60-66页 |
| 4.3.1 细胞培养及质粒转染 | 第60-61页 |
| 4.3.2 凝胶阻滞分析（Gel Shift assay） | 第61-62页 |
| 4.3.3 免疫共沉淀（Co-IP） | 第62-63页 |
| 4.3.4 免疫荧光染色 | 第63-64页 |
| 4.3.5 Nanog启动子质粒构建 | 第64页 |
| 4.3.6 双荧光素酶报告基因检测 | 第64-66页 |
| 4.3.7 数据分析 | 第66页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第66-69页 |
| 4.4.1 FoxA1体外结合Nanog启动子，而Grg3不能直接结合于该区域 | 第66-67页 |
| 4.4.2 FoxA1蛋白与Grg3蛋白直接相互作用 | 第67-68页 |
| 4.4.3 FoxA1与Grg3协同抑制Nanog启动子活性 | 第68-69页 |
| 4.5 小结 | 第69-70页 |
| 第5章 FOXA1表达影响P19细胞中Nanog启动子表观遗传修饰状态 | 第70-74页 |
| 5.1 前言 | 第70页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第70-71页 |
| 5.2.1 细胞 | 第70页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第70-71页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第71页 |
| 5.3 实验方法 | 第71-72页 |
| 5.3.1 细胞转染 | 第71-72页 |
| 5.3.2 染色质免疫共沉淀 | 第72页 |
| 5.3.3 DNA甲基化分析 | 第72页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第72-73页 |
| 5.4.1 外源表达FoxA1改变Nanog启动子的组蛋白修饰状态 | 第72-73页 |
| 5.4.2 外源表达FoxA1不改变Nanog启动子DNA甲基化 | 第73页 |
| 5.5 小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-90页 |
| 附录A 常用缓冲液和试剂配方 | 第90-92页 |
| 附录B 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
