| 目录 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-37页 |
| 1.1 结核病与结核分枝杆菌介绍 | 第17-28页 |
| 1.1.1 结核病及其研究现状 | 第17-20页 |
| 1.1.2 结核分枝杆菌基本特征 | 第20-22页 |
| 1.1.3 结核分枝杆菌的耐药性及对策 | 第22-23页 |
| 1.1.4 耻垢分枝杆菌作为结核分枝杆菌的模式生物 | 第23-24页 |
| 1.1.5 分枝杆菌的遗传操作 | 第24-28页 |
| 1.2 分枝杆菌中的生物素合成途径研究 | 第28-33页 |
| 1.2.1 生物素的生理学功能简介 | 第28-29页 |
| 1.2.2 生物素合成途径简介 | 第29-31页 |
| 1.2.3 生物素前体分子合成途径研究 | 第31页 |
| 1.2.4 生物素合成途径在分枝杆菌中的重要性 | 第31-32页 |
| 1.2.5 针对生物素合成途径的抑制剂研究 | 第32-33页 |
| 1.3 BioF的研究进展 | 第33-35页 |
| 1.3.1 BioF的相关结构研究 | 第33-34页 |
| 1.3.2 BioF的催化机制研究 | 第34-35页 |
| 1.3.3 分枝杆菌中BioF的研究现状 | 第35页 |
| 1.4 论文的立题依据及主要内容 | 第35-37页 |
| 第二章 MsBioF克隆、表达、纯化和鉴定 | 第37-61页 |
| 2.1 材料与方法 | 第37-48页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第37-42页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第42-48页 |
| 2.2 结果与分析 | 第48-58页 |
| 2.2.1 MsbioF基因的克隆 | 第48-50页 |
| 2.2.2 MsBioF的表达与纯化 | 第50-53页 |
| 2.2.3 MsBioF蛋白的体外寡聚状态 | 第53-56页 |
| 2.2.4 MsBioF及MsBioF与PLP混合后的分子量的质谱测定 | 第56-57页 |
| 2.2.5 MsBioF的多克隆抗体的制备及检测 | 第57-58页 |
| 2.2.6 MsBioF蛋白体内表达的鉴定 | 第58页 |
| 2.3 讨论 | 第58-59页 |
| 2.3.1 MsBioF在溶液中以单体的形式存在 | 第58-59页 |
| 2.3.2 MsBioF在溶液中不能与PLP形成加合物 | 第59页 |
| 2.4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第三章 MsBioF的结晶及结构解析 | 第61-78页 |
| 3.1 材料与方法 | 第61-66页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第61-62页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第62-66页 |
| 3.2 结果与分析 | 第66-76页 |
| 3.2.1 MsbioF结晶用蛋白的表达纯化 | 第66-69页 |
| 3.2.2 MsBioF的晶体初筛 | 第69-71页 |
| 3.2.3 MsBioF晶体和防冻液的优化 | 第71-73页 |
| 3.2.4 数据收集 | 第73页 |
| 3.2.5 MsBioF的整体结构描述 | 第73-75页 |
| 3.2.6 MsBioF结构的共性与特性 | 第75-76页 |
| 3.3 讨论 | 第76-77页 |
| 3.3.1 MsBioF结晶状态下以二聚体的形式存在 | 第76页 |
| 3.3.2 MsBioF与大肠杆菌中的同源蛋白整体结构类似但有局部差异 | 第76-77页 |
| 3.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 第四章 耻垢分枝杆菌中MsbioF的敲除和功能研究 | 第78-97页 |
| 4.1 材料与方法 | 第78-87页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第78-81页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第81-87页 |
| 4.2 结果与分析 | 第87-95页 |
| 4.2.1 耻垢分枝杆菌中MsbioF基因的敲除 | 第87-89页 |
| 4.2.2 △MsbioF的表型观察 | 第89-92页 |
| 4.2.3 耻垢分枝杆菌中BioF体内功能的检测 | 第92-93页 |
| 4.2.4 三氟代丙氨酸抑菌效果分析 | 第93-95页 |
| 4.3 讨论 | 第95页 |
| 4.3.1 MsbioF是耻垢分枝杆菌无外源生物素的条件下生长所必需的 | 第95页 |
| 4.3.2 三氟代丙氨酸体内不能很好地抑制菌体的生长 | 第95页 |
| 4.4 本章小结 | 第95-97页 |
| 第五章 MsBioF可能的催化机制和活性调节方式研究 | 第97-115页 |
| 5.1 材料与方法 | 第97-102页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第97-99页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第99-102页 |
| 5.2 结果与分析 | 第102-111页 |
| 5.2.1 MsBioF可能的活性中心鉴定 | 第102-105页 |
| 5.2.2 维持MsBioF体内活性的不可缺少的活性位点分析 | 第105-107页 |
| 5.2.3 MsBioF的N端(1-37)对其体内活性的影响 | 第107-109页 |
| 5.2.4 Cys136对MsBioF体内活性的影响 | 第109-111页 |
| 5.3 讨论 | 第111-114页 |
| 5.3.1 MsBioF的活性位点是与大肠杆菌有差异的 | 第111-112页 |
| 5.3.2 两MsBioF单体通过N端交换形成二聚体是MsBioF体内活性所必需的 | 第112页 |
| 5.3.3 MsBioF体内二聚体的形成机制分析 | 第112-113页 |
| 5.3.4 MsBioF体内活性部位关键氨基酸相互作用的分析 | 第113页 |
| 5.3.5 MsBio可能的催化机制 | 第113-114页 |
| 5.4 本章小结 | 第114-115页 |
| 第六章 结核分枝杆菌中BioF的相关研究 | 第115-132页 |
| 6.1 材料与方法 | 第115-121页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第115-117页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第117-121页 |
| 6.2 结果与分析 | 第121-129页 |
| 6.2.1 MtbioF1基因的表达纯化 | 第121-124页 |
| 6.2.2 MtBioF1蛋白的体外寡聚状态 | 第124-125页 |
| 6.2.3 MtbioF1和MtbioF2基因回补△MsbioF的表型观察 | 第125-127页 |
| 6.2.4 MtBioF可能的活性位点和及其功能分析 | 第127-129页 |
| 6.3 讨论 | 第129-131页 |
| 6.3.1 结核分枝杆菌中在生物素合成中发挥作用的是MtbioF1 | 第129-130页 |
| 6.3.2 结核分枝杆菌和耻垢分枝杆菌中BioF的功能是保守的 | 第130页 |
| 6.3.3 MtBioF1对应活性中心对其体内活性的影响 | 第130页 |
| 6.3.4 MtBioF1在溶液中以单体的形式存在 | 第130-131页 |
| 6.4 本章小结 | 第131-132页 |
| 全文总结与展望 | 第132-135页 |
| 本课题的不足之处和未来计划 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 攻读博士学位期间发表和待发表的学术论文 | 第144-145页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第145页 |
