| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略语 | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-32页 |
| 1.1 根瘤菌与豆科植物共生的概念和意义 | 第14-15页 |
| 1.2 根瘤菌与豆科植物共生固氮体系研究 | 第15-26页 |
| 1.2.1 结瘤早期信号传导 | 第16-17页 |
| 1.2.2 根瘤菌侵染和根瘤器官形成过程 | 第17-26页 |
| 1.2.3 豆科植物中参与共生固氮的基因 | 第26页 |
| 1.3 植物紫色酸性磷酸酶 | 第26-30页 |
| 1.3.1 磷对共生固氮的调节作用的研究 | 第26-27页 |
| 1.3.2 植物紫色酸性磷酸酶的概况 | 第27-28页 |
| 1.3.3 植物紫色酸性磷酸酶的结构 | 第28页 |
| 1.3.4 植物紫色酸性磷酸酶的生物功能 | 第28-29页 |
| 1.3.5 植物紫色酸性磷酸酶与共生固氮的关系 | 第29-30页 |
| 1.3.6 PPD亚家族 | 第30页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 实验材料与方法 | 第32-56页 |
| 2.1 材料 | 第32-43页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第32页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第32-33页 |
| 2.1.3 培养基 | 第33-37页 |
| 2.1.4 常用缓冲液和反应试剂 | 第37-41页 |
| 2.1.5 分子生物学试剂 | 第41页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第41-43页 |
| 2.2 实验方案设计 | 第43-44页 |
| 2.3 方法 | 第44-56页 |
| 2.3.1 分子生物学基本操作 | 第44页 |
| 2.3.2 酵母感受态制备及酵母转化 | 第44-45页 |
| 2.3.3 酵母小范围mating | 第45页 |
| 2.3.4 紫云英Y2H-AD-cDNA文库的筛选 | 第45-46页 |
| 2.3.5 滤纸平板影印显色 | 第46页 |
| 2.3.6 蛋白质纯化及抗体制备 | 第46-48页 |
| 2.3.7 Western Bloting | 第48页 |
| 2.3.8 植物材料的准备及结瘤实验 | 第48-49页 |
| 2.3.9 植物总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 2.3.10 植物组织总蛋白的提取方法 | 第50页 |
| 2.3.11 共生体及共生体膜的分离 | 第50-51页 |
| 2.3.12 Real-time PCR检测AsPPD1 的时空表达和在低磷条件下的转录水平 | 第51-52页 |
| 2.3.13 AsPPD1 蛋白在酵母表达系统中表达和纯化方法 | 第52页 |
| 2.3.14 AsPPD1 蛋白的酶活测定方法 | 第52-53页 |
| 2.3.15 AsPPD1 蛋白的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| 2.3.16 紫云英的毛根转化 | 第54页 |
| 2.3.17 乙炔还原法测定固氮酶活 | 第54页 |
| 2.3.18 根瘤的石蜡切片和电镜切片制作方法 | 第54-55页 |
| 2.3.19 免疫荧光技术和免疫电镜技术 | 第55页 |
| 2.3.20 高效液相色谱技术HPLC定量分析ATP、ADP和AMP方法 | 第55-56页 |
| 3 结果与讨论 | 第56-88页 |
| 3.1 AsPPD1 蛋白的结构特性 | 第56-59页 |
| 3.2 AsPPD1 蛋白的酶活性 | 第59-62页 |
| 3.3 AsPPD1 在共生和低磷条件下的转录水平 | 第62-67页 |
| 3.3.1 AsPPD1 在接种根瘤菌后的转录水平 | 第62-65页 |
| 3.3.2 AsPPD1 在低磷处理后的转录水平 | 第65-67页 |
| 3.4 AsPPD1 蛋白的亚细胞定位 | 第67-74页 |
| 3.4.1 AsPPD1 在洋葱表皮细胞中的定位 | 第67-69页 |
| 3.4.2 AsPPD1 在发根细胞中的定位 | 第69页 |
| 3.4.3 AsPPD1 蛋白抗体特异性检测 | 第69-70页 |
| 3.4.4 AsPPD1 蛋白的免疫荧光定位 | 第70-73页 |
| 3.4.5 AsPPD1 蛋白的免疫电镜定位 | 第73-74页 |
| 3.5 AsPPD1 在共生固氮过程中的功能 | 第74-83页 |
| 3.5.1 AsPPD1 在紫云英发根中超表达 | 第74-76页 |
| 3.5.2 AsPPD1 在紫云英发根和根瘤中沉默 | 第76-79页 |
| 3.5.3 AsPPD1 参与共生固氮过程中根瘤原基的形成 | 第79-80页 |
| 3.5.4 AsPPD1 在根和根瘤中参与调控ADP水平、ATP/ADP比值和能荷 | 第80-83页 |
| 3.6 酵母双杂交筛选与AsPPD1 相互作用的蛋白 | 第83-88页 |
| 3.6.1 紫云英AD-cDNA文库的筛选 | 第83-86页 |
| 3.6.2 MsrB和cdc的相关研究 | 第86-88页 |
| 4 总结与讨论 | 第88-92页 |
| 4.1 总结 | 第88-89页 |
| 4.2 讨论 | 第89-91页 |
| 4.3 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-114页 |
| 附录一：本研究所用引物 | 第114-115页 |
| 附录二：基因的核苷酸和蛋白质序列 | 第115-117页 |
| 附录三：论文发表情况 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
