| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第17-32页 |
| 1.1 蓝舌病概述 | 第17-20页 |
| 1.1.1 蓝舌病流行情况 | 第17页 |
| 1.1.2 蓝舌病流行特点 | 第17-18页 |
| 1.1.3 蓝舌病血清型分布 | 第18页 |
| 1.1.4 蓝舌病临床症状和病理变化 | 第18-19页 |
| 1.1.5 蓝舌病诊断 | 第19-20页 |
| 1.1.6 蓝舌病防控措施 | 第20页 |
| 1.2 蓝舌病病毒 | 第20-24页 |
| 1.2.1 BTV形态特征和基因结构 | 第20-22页 |
| 1.2.2 BTV理化特性 | 第22页 |
| 1.2.3 BTV基因产物及生物学功能 | 第22-24页 |
| 1.3 病毒核酸检测方法 | 第24-28页 |
| 1.4 腺病毒载体的概述 | 第28-30页 |
| 1.4.1 腺病毒的基本特征 | 第28-29页 |
| 1.4.2 腺病毒载体的优势 | 第29页 |
| 1.4.3 腺病毒载体的构建方法 | 第29-30页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-66页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-41页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.3 病毒、细胞、基因和实验动物 | 第33页 |
| 2.1.4 PCR扩增引物与探针序列 | 第33-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-66页 |
| 2.2.1 病毒的增殖 | 第41页 |
| 2.2.2 RNA及基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.3 蓝舌病病毒核酸One-step RT-PCR群特异性检测方法的建立 | 第42-45页 |
| 2.2.4 蓝舌病病毒核酸nested RT-PCR群特异性检测方法的建立 | 第45-48页 |
| 2.2.5 BTV L2基因序列分析 | 第48-49页 |
| 2.2.6 蓝舌病病毒国内流行株RT-PCR型特异性检测方法的建立 | 第49-52页 |
| 2.2.7 蓝舌病病毒Real-time RT-PCR型特异性检测方法的建立 | 第52-55页 |
| 2.2.8 BTV-16重组腺病毒载体疫苗的构建 | 第55-62页 |
| 2.2.9 重组腺病毒疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果评价 | 第62-64页 |
| 2.2.10重组腺病毒疫苗对绵羊的免疫效果评价 | 第64-66页 |
| 3 结果 | 第66-122页 |
| 3.1 病毒致细胞病变结果 | 第66-67页 |
| 3.2 BTV-1~24型病毒ds RNA的SDS-PAGE | 第67-68页 |
| 3.3 蓝舌病病毒核酸One-step RT-PCR群特异性检测体系评价 | 第68-70页 |
| 3.3.1 One-step RT-PCR特异性 | 第68页 |
| 3.3.2 BTV-16 TCID50测定 | 第68-69页 |
| 3.3.3 One-step RT-PCR敏感性 | 第69页 |
| 3.3.4 样品检测 | 第69-70页 |
| 3.3.5 One-step RT-PCR重复性 | 第70页 |
| 3.4 蓝舌病病毒核酸nested RT-PCR群特异性检测体系评价 | 第70-73页 |
| 3.4.1 重组质粒鉴定结果 | 第70-71页 |
| 3.4.2 nested RT-PCR特异性 | 第71页 |
| 3.4.3 nested RT-PCR敏感性 | 第71-72页 |
| 3.4.4 样品检测 | 第72-73页 |
| 3.4.5 nested RT-PCR重复性 | 第73页 |
| 3.5 BTV L2基因分析 | 第73-74页 |
| 3.5.1 BTV L2基因同源性分析结果 | 第73页 |
| 3.5.2 BTV L2基因系统进化树 | 第73-74页 |
| 3.6 蓝舌病病毒核酸国内流行株RT-PCR型特异性检测体系评价 | 第74-79页 |
| 3.6.1 重组质粒PCR鉴定结果 | 第74页 |
| 3.6.2 RT-PCR各分型检测方法的特异性 | 第74-76页 |
| 3.6.3 RT-PCR各型特异性检测方法的敏感性 | 第76-77页 |
| 3.6.4 模拟样品检测 | 第77-79页 |
| 3.6.5 RT-PCR重复性 | 第79页 |
| 3.7 蓝舌病病毒核酸Real-time RT-PCR分型检测体系的评价 | 第79-87页 |
| 3.7.1 Real-time RT-PCR特异性 | 第79-80页 |
| 3.7.2 Real-time RT-PCR标准曲线的建立 | 第80-82页 |
| 3.7.3 Real-time RT-PCR敏感性 | 第82-83页 |
| 3.7.4 Real-time RT-PCR重复性 | 第83-87页 |
| 3.7.5 样品检测 | 第87页 |
| 3.8 BTV-16重组腺病毒疫苗的构建结果 | 第87-95页 |
| 3.8.1 目的基因的克隆 | 第87-88页 |
| 3.8.2 重组腺病毒穿梭载体的鉴定结果 | 第88-89页 |
| 3.8.3 重组腺病毒载体的鉴定 | 第89-90页 |
| 3.8.4 重组腺病毒的鉴定 | 第90-91页 |
| 3.8.5 重组腺病毒生长曲线的测定 | 第91-92页 |
| 3.8.6 重组腺病毒稳定性分析 | 第92-95页 |
| 3.9 重组腺病毒疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果评价 | 第95-110页 |
| 3.9.1 免疫小鼠血清中特异性抗体的测定 | 第95-99页 |
| 3.9.2 淋巴细胞增殖结果 | 第99-100页 |
| 3.9.3 细胞因子检测 | 第100-106页 |
| 3.9.4 体外中和试验 | 第106-107页 |
| 3.9.5 体内中和试验 | 第107-110页 |
| 3.10重组腺病毒疫苗对绵羊的免疫效果评价 | 第110-122页 |
| 3.10.1 免疫绵羊血清中特异性抗体的测定 | 第110-112页 |
| 3.10.2 淋巴细胞增殖结果 | 第112-113页 |
| 3.10.3 细胞因子检测 | 第113-119页 |
| 3.10.4 体外中和试验 | 第119-120页 |
| 3.10.5 体内中和试验 | 第120-122页 |
| 4 讨论 | 第122-133页 |
| 4.1 核酸诊断技术的优势 | 第122页 |
| 4.2 PCR技术操作重点 | 第122-123页 |
| 4.3 群特异性BTV核酸检测方法的选择 | 第123-124页 |
| 4.4 L2基因进化树的构建 | 第124页 |
| 4.5 型特异性BTV分型检测方法的建立 | 第124-127页 |
| 4.5.1 BTV RT-PCR分型检测方法的建立 | 第125页 |
| 4.5.2 BTV real-time RT-PCR型特异性检测方法的建立 | 第125-126页 |
| 4.5.3 型特异性检测方法改善的初步构想 | 第126-127页 |
| 4.6 蓝舌病疫苗研究情况 | 第127-128页 |
| 4.7 BTV-16重组腺病毒疫苗的构建 | 第128-130页 |
| 4.8 重组腺病毒疫苗对BALB/c小鼠免疫效果评价 | 第130-131页 |
| 4.9 重组腺病毒疫苗对绵羊免疫效果评价 | 第131页 |
| 4.10 BTV疫苗研究工作的展望 | 第131-133页 |
| 5 结论 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-143页 |
| 附录 | 第143-158页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第158页 |
