| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-44页 |
| 1.1 木质纤维素 | 第16-21页 |
| 1.1.1 纤维素 | 第17-18页 |
| 1.1.2 半纤维素 | 第18-20页 |
| 1.1.3 木质素 | 第20-21页 |
| 1.2 降解木质纤维素的真菌 | 第21-23页 |
| 1.3 瑞氏木霉(Trichoderma reesei)的纤维素酶系 | 第23-28页 |
| 1.3.1 纤维素酶的种类 | 第23-26页 |
| 1.3.2 不同酶组分之间的协同作用 | 第26页 |
| 1.3.3 一种新的纤维素转化策略 | 第26-28页 |
| 1.4 测定纤维素酶活的底物 | 第28-31页 |
| 1.4.1 可溶性底物 | 第28-29页 |
| 1.4.2 不溶性底物 | 第29-31页 |
| 1.5 纤维素酶活性测定 | 第31-35页 |
| 1.5.1 内切纤维素酶活性的测定 | 第32页 |
| 1.5.2 外切纤维素酶活性的测定 | 第32-33页 |
| 1.5.3 β-D-葡萄糖苷酶活性的测定 | 第33页 |
| 1.5.4 总纤维素酶活的测定 | 第33-35页 |
| 1.6 T. reesei的系统生物学研究 | 第35-42页 |
| 1.6.1 T. reesei纤维素酶和半纤维素酶的基因组研究 | 第35-36页 |
| 1.6.2 T. reesei基因组碳水化合物水解酶的分布 | 第36-37页 |
| 1.6.3 T. reesei突变株基因组测序以确定影响纤维素酶生产的菌株 | 第37-38页 |
| 1.6.4 T. reesei的转录组研究 | 第38-40页 |
| 1.6.5 T. reesei的分泌组研究 | 第40-41页 |
| 1.6.6 T. reesei的代谢组学研究 | 第41-42页 |
| 1.7 立题依据 | 第42-44页 |
| 第2章 不同碳源下T. reesei胞外糖苷水解酶的分析研究 | 第44-56页 |
| 2.1 材料与方法 | 第44-47页 |
| 2.1.1 菌种 | 第44页 |
| 2.1.2 培养基及试剂 | 第44-45页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第45页 |
| 2.1.4 粗酶液的提取 | 第45-46页 |
| 2.1.5 糖苷水解酶活性的测定 | 第46页 |
| 2.1.6 糖苷水解酶谱及寡糖谱分析 | 第46-47页 |
| 2.1.7 T. reesei功能蛋白质组学分析 | 第47页 |
| 2.2 结果与分析 | 第47-54页 |
| 2.2.1 不同碳源发酵粗酶液中还原糖测定以及寡糖谱分析 | 第47-48页 |
| 2.2.2 T. reesei胞外糖苷水解酶活性的测定及动态酶谱分析 | 第48-51页 |
| 2.2.3 T. reesei在不同的碳源上其功能蛋白组学分析 | 第51-54页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第3章 荧光辅助糖电泳技术与纤维素酶降解模式的分析 | 第56-77页 |
| 3.1 材料与方法 | 第56-64页 |
| 3.1.1 化学试剂 | 第56页 |
| 3.1.2 再生无定形纤维素(RAC)底物的制备 | 第56-57页 |
| 3.1.3 T. reesei的内切纤维素酶TrCel12A的异源表达 | 第57-61页 |
| 3.1.4 内切纤维素酶ChCel5A的表达纯化 | 第61-62页 |
| 3.1.5 T. reesei外切纤维素酶Ⅰ(TrCel7A)的纯化 | 第62页 |
| 3.1.6 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第62-63页 |
| 3.1.7 酶解实验测定 | 第63页 |
| 3.1.8 样品荧光标记 | 第63页 |
| 3.1.9 电泳条件优化 | 第63页 |
| 3.1.10 电泳数据定量提取 | 第63-64页 |
| 3.2 结果与分析 | 第64-75页 |
| 3.2.1 TrCel12A的异源表达 | 第64-65页 |
| 3.2.2 ChCel5A的纯化 | 第65页 |
| 3.2.3 TrCel7A的纯化 | 第65-67页 |
| 3.2.4 利用FACE测定纤维寡糖的浓度 | 第67-69页 |
| 3.2.5 利用FACE分析产物谱快速确定纤维素酶的种类 | 第69-70页 |
| 3.2.6 利用时间过程的产物谱分析区分内切纤维素酶的降解模式 | 第70-75页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第75-77页 |
| 第4章 T.reesei不同内切纤维素酶不同降解机制的研究 | 第77-94页 |
| 4.1 材料与方法 | 第77-80页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第77页 |
| 4.1.2 培养基及相关试剂 | 第77-78页 |
| 4.1.3 菌种活化与培养 | 第78页 |
| 4.1.4 T. reesei RNA提取及反转录 | 第78页 |
| 4.1.5 内切纤维素酶基因克隆与重组质粒的构建 | 第78-79页 |
| 4.1.6 EG Ⅰ的异源表达 | 第79页 |
| 4.1.7 EG Ⅱ、EGⅣ的异源表达 | 第79页 |
| 4.1.8 不同家族内切纤维素酶水解RAC与寡糖的FACE检测 | 第79页 |
| 4.1.9 不同家族内切纤维素酶的生物信息学分析 | 第79-80页 |
| 4.2 结果与分析 | 第80-92页 |
| 4.2.1 内切纤维素酶基因的扩增 | 第80-81页 |
| 4.2.2 内切纤维素酶的表达纯化 | 第81-82页 |
| 4.2.3 内切纤维素酶水解RAC产物谱的FACE检测 | 第82-84页 |
| 4.2.4 内切纤维素酶水解寡糖产物谱的FACE检测 | 第84-86页 |
| 4.2.5 内切纤维素酶活性中心的结构与表面电势分析 | 第86-88页 |
| 4.2.6 内切纤维素酶活性部位与糖环的相互作用分析 | 第88-90页 |
| 4.2.7 内切纤维素酶结合寡糖的分子动力学模拟 | 第90-92页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第92-94页 |
| 第5章 荧光光谱测定纤维素酶与底物的结合能力 | 第94-103页 |
| 5.1 材料与方法 | 第94-96页 |
| 5.1.1 试剂 | 第94-95页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第95页 |
| 5.1.2 内切纤维素酶ChCel5A的表达纯化 | 第95页 |
| 5.1.3 T. reesei外切纤维素酶Ⅰ(TrCel7A)的纯化 | 第95页 |
| 5.1.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第95-96页 |
| 5.1.5 纤维素酶活性的测定 | 第96页 |
| 5.1.6 荧光体荧光光谱的测定 | 第96页 |
| 5.1.7 荧光体与pNP类底物结合的荧光光谱测定 | 第96页 |
| 5.2 结果与分析 | 第96-101页 |
| 5.2.1 荧光体自身荧光光谱的测定 | 第96-98页 |
| 5.2.2 荧光光谱的淬灭与结合常数及结合能的计算 | 第98-100页 |
| 5.2.3 使用荧光光谱的方法计算纤维素酶与底的结合常数以及结合自由能 | 第100-101页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第101-103页 |
| 全文总结与展望 | 第103-106页 |
| 参考文献 | 第106-116页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 附件 | 第119页 |
