附件 | 第5-6页 |
摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
英文缩略表 | 第12-13页 |
第一章 引言 | 第13-26页 |
1.1 研究目的 | 第13-14页 |
1.2 国内外研究进展 | 第14-25页 |
1.2.1 狂犬病研究 | 第14-18页 |
1.2.2 狂犬病病毒研究 | 第18-19页 |
1.2.3 狂犬病病毒疫苗研究进展 | 第19-21页 |
1.2.4 腺病毒载体的概述 | 第21-23页 |
1.2.5 鞭毛蛋白研究 | 第23-25页 |
1.3 研究内容及方法 | 第25-26页 |
第二章 鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的原核表达及纯化 | 第26-33页 |
2.1 材料与方法 | 第26-28页 |
2.1.1 材料 | 第26页 |
2.1.2 重组表达菌的构建 | 第26-27页 |
2.1.3 鞭毛蛋白FljB、Fli C和FljB’-FliC的原核表达 | 第27页 |
2.1.4 鞭毛蛋白FljB、Fli C和FljB’-FliC的纯化 | 第27-28页 |
2.1.5 鞭毛蛋白FljB、Fli C和FljB’-FliC western blot检测 | 第28页 |
2.2 结果与分析 | 第28-31页 |
2.2.1 目的蛋白表达载体构建及鉴定结果 | 第28-29页 |
2.2.2 SDS-PAGE验证目的蛋白的表达 | 第29-30页 |
2.2.3 目的蛋白的纯化 | 第30页 |
2.2.4 目的蛋白western blot鉴定结果 | 第30-31页 |
2.3 讨论 | 第31-33页 |
第三章 鞭毛蛋白在狂犬病灭活疫苗中的免疫增强作用 | 第33-39页 |
3.1 材料与方法 | 第33-35页 |
3.1.1 鞭毛蛋白FljB、Fli C和FljB’-FliC的表达和纯化 | 第33页 |
3.1.2 小鼠和脾细胞 | 第33-34页 |
3.1.3 刺激物 | 第34页 |
3.1.4 抗原准备 | 第34页 |
3.1.5 免疫 | 第34页 |
3.1.6 ELISA | 第34页 |
3.1.7 酶联免疫斑点实验(ELISPOT) | 第34-35页 |
3.1.8 数据分析 | 第35页 |
3.2 结果 | 第35-37页 |
3.2.1 蛋白纯化和分析 | 第35页 |
3.2.2 TLR5激动剂鞭毛蛋白对于WKRV在小鼠中的免疫佐剂特性 | 第35-36页 |
3.2.3 TLR5激动剂鞭毛蛋白在小鼠体内所诱导的IFN-γ 和IL-4 生成 | 第36-37页 |
3.3 讨论 | 第37-39页 |
第四章 鞭毛蛋白与狂犬病毒G蛋白的重组腺病毒构建及其免疫增强作用的评价 | 第39-56页 |
4.1 材料 | 第40页 |
4.1.1 载体、细胞、病毒及实验动物 | 第40页 |
4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
4.1.3 主要仪器和设备 | 第40页 |
4.2 方法 | 第40-45页 |
4.2.1 pAd-G、pAd-GB和pAd-GC重组腺病毒质粒的构建 | 第40-42页 |
4.2.2 复制缺陷型重组腺病毒Ad-G、Ad-GB和Ad-GC的获得及鉴定 | 第42-43页 |
4.2.3 复制缺陷型重组腺病毒在小鼠中免疫效果分析 | 第43-45页 |
4.2.4 数据分析 | 第45页 |
4.3 结果 | 第45-54页 |
4.3.1 重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-G和重组腺病毒质粒pAd-G的构建 | 第45-47页 |
4.3.2 重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-GB和重组腺病毒质粒pAd-GB的构建 | 第47-48页 |
4.3.3 重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-GC和重组腺病毒质粒pAd-GC的构建 | 第48-49页 |
4.3.4 重组腺病毒Ad-G、Ad-GB和Ad-GC感染细胞的荧光观察及细胞病变 | 第49-50页 |
4.3.5 重组腺病毒Ad-G、Ad-GB和Ad-GC稳定性检测 | 第50-51页 |
4.3.6 目的基因的表达检测 | 第51页 |
4.3.7 重组腺病毒Ad-G、Ad-GB和Ad-GC的准备 | 第51-52页 |
4.3.8 IgG抗体的检测 | 第52-53页 |
4.3.9 细胞因子IFN-γ 和IL-4 的检测 | 第53页 |
4.3.10 流式细胞术检测T细胞增殖分化情况 | 第53-54页 |
4.4 讨论 | 第54-56页 |
第五章 全文结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
作者简历 | 第64页 |