| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 基因芯片技术及其在病原检测及研究中的应用 | 第12-17页 |
| 1.1.1 基因芯片技术 | 第12-13页 |
| 1.1.2 基因芯片在病原检测及研究中的应用 | 第13-17页 |
| 1.2 六种重要猪病病原微生物研究进展 | 第17-24页 |
| 1.2.1 猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.2 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.3 猪肺炎支原体研究进展 | 第21-24页 |
| 第2章 引言 | 第24-28页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 2.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 2.2.1 基因序列分析、引物和探针的设计 | 第25页 |
| 2.2.2 单一病原基因芯片检测方法的建立 | 第25页 |
| 2.2.3 六种病原同步检测基因芯片方法的建立 | 第25-26页 |
| 2.3 技术路线 | 第26-28页 |
| 第3章 单一病原基因芯片检测方法的优化及建立 | 第28-62页 |
| 3.1 材料 | 第28-30页 |
| 3.1.1 病毒及细菌 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.3 主要材料及仪器 | 第29页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第29-30页 |
| 3.2 单一病原基因芯片检测方法的建立及优化 | 第30-41页 |
| 3.2.1 引物及探针的设计 | 第30-32页 |
| 3.2.2 细菌的培养 | 第32-33页 |
| 3.2.3 核酸提取 | 第33-34页 |
| 3.2.4 目的基因的扩增 | 第34页 |
| 3.2.5 目的基因克隆 | 第34-36页 |
| 3.2.6 单一病原基因芯片检测方法的优化及建立 | 第36-41页 |
| 3.3 结果 | 第41-58页 |
| 3.3.1 病原核酸PCR扩增结果 | 第41页 |
| 3.3.2 重组质粒PCR鉴定结果 | 第41-43页 |
| 3.3.3 六种病原PCR扩增退火温度优化结果 | 第43-45页 |
| 3.3.4 六种病原检测探针筛选结果 | 第45-46页 |
| 3.3.5 探针点样浓度优化结果 | 第46页 |
| 3.3.6 杂交液的优化结果 | 第46-47页 |
| 3.3.7 PCR外循环数优化结果 | 第47-49页 |
| 3.3.8 杂交温度优化 | 第49-51页 |
| 3.3.9 杂交时间优化结果 | 第51-53页 |
| 3.3.10 方法评估试验结果 | 第53-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-60页 |
| 3.4.1 靶基因序列的选择 | 第58-59页 |
| 3.4.2 标记方法的选择 | 第59页 |
| 3.4.3 探针的筛选及杂交条件的优化 | 第59-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-62页 |
| 第4章 六种病原基因芯片检测方法的建立及初步应用 | 第62-74页 |
| 4.1 材料、试剂及仪器 | 第62页 |
| 4.1.1 标准毒株及细菌 | 第62页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第62页 |
| 4.1.4 主要试剂配制 | 第62页 |
| 4.2 六种病原基因芯片检测方法的建立及应用 | 第62-64页 |
| 4.2.1 六对特异性嵌合引物浓度优化 | 第62-63页 |
| 4.2.2 杂交温度优化 | 第63-64页 |
| 4.2.3 杂交时间优化 | 第64页 |
| 4.2.4 方法评估 | 第64页 |
| 4.2.5 临床初步应用 | 第64页 |
| 4.3 结果 | 第64-71页 |
| 4.3.1 多重PCR扩增中引物浓度优化结果 | 第64-66页 |
| 4.3.2 多重PCR反应外循环数优化结果 | 第66页 |
| 4.3.3 杂交温度优化结果 | 第66-67页 |
| 4.3.4 杂交时间优化结果 | 第67页 |
| 4.3.5 特异性试验结果 | 第67页 |
| 4.3.6 敏感性试验结果 | 第67-68页 |
| 4.3.7 重复性试验结果 | 第68-69页 |
| 4.3.8 基因芯片保存期试验结果 | 第69-70页 |
| 4.3.9 临床检测结果 | 第70-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 4.4.1 多重PCR扩增影响因素 | 第71-72页 |
| 4.4.2 多病原检测芯片的方法评估 | 第72页 |
| 4.4.3 研究中存在的部分问题 | 第72-73页 |
| 4.5 小结 | 第73-74页 |
| 第5章 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 缩略词表 | 第82-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 在读期间发表的文章、参与的专利及项目 | 第88-89页 |