| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-12页 |
| 2 试验材料 | 第12-14页 |
| 2.1 植物材料、试验菌种及质粒 | 第12页 |
| 2.2 试验仪器 | 第12页 |
| 2.3 主要试剂 | 第12-13页 |
| 2.4 主要溶液配制 | 第13页 |
| 2.5 主要培养基 | 第13-14页 |
| 3 试验方法 | 第14-24页 |
| 3.1 植物材料培养 | 第14页 |
| 3.2 pCM1307-3FLAG-3HA-CPK10 植物表达载体的构建 | 第14-16页 |
| 3.2.1 引物的设计 | 第14页 |
| 3.2.2 目的基因的扩增 | 第14-15页 |
| 3.2.3 目的基因连接pMD18-T vector及蓝白斑筛选 | 第15页 |
| 3.2.4 目的基因连接pCM1307-3FLAG-3HA载体及酶切验证 | 第15-16页 |
| 3.3 原生质体转化及蛋白瞬时表达 | 第16页 |
| 3.4 原生质体中蛋白提取及TAP技术亲和蛋白 | 第16-17页 |
| 3.5 亲和蛋白的浓缩 | 第17页 |
| 3.6 蛋白胶的银染及生物质谱分析 | 第17页 |
| 3.7 Ca Cl2法制备大肠杆菌DH5α 感受态细胞 | 第17页 |
| 3.8 质粒提取 | 第17-18页 |
| 3.9 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第18页 |
| 3.10 花序浸染法农杆菌转化拟南芥植株 | 第18-19页 |
| 3.11 拟南芥转基因阳性植株的筛选 | 第19页 |
| 3.12 植物中可溶性总蛋白的提取及TAP技术 | 第19-20页 |
| 3.13 Western-blotting检测蛋白表达 | 第20页 |
| 3.14 植物总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 3.15 基因半定量RT-PCR | 第21-24页 |
| 3.15.1 引物的设计 | 第21页 |
| 3.15.2 反转录反应 | 第21-22页 |
| 3.15.3 内参基因的扩增 | 第22页 |
| 3.15.4 PCR扩增目的基因 | 第22-24页 |
| 4 结果与分析 | 第24-34页 |
| 4.1 pCM1307-3FLAG-3HA-CPK10 植物表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 4.1.1 目的基因的扩增及测序结果分析 | 第24页 |
| 4.1.2 TAP用双元载体的构建及重组子鉴定 | 第24-25页 |
| 4.2 Western-blotting分析原生质体转化后的瞬时蛋白表达 | 第25-27页 |
| 4.3 转基因阳性植株的筛选及Western-blotting鉴定 | 第27-28页 |
| 4.4 TAP技术筛选蛋白复合体浓缩后Western-blotting检测 | 第28页 |
| 4.5 浓缩后蛋白银染结果 | 第28-29页 |
| 4.6 TAP技术结合质谱检查分析互作蛋白 | 第29-30页 |
| 4.7 互作蛋白信息分析 | 第30-32页 |
| 4.8 RT-PCR分析 | 第32-34页 |
| 5 讨论与展望 | 第34-36页 |
| 5.1 关于TAP技术的研究 | 第34页 |
| 5.2 TAP标签的选择 | 第34-35页 |
| 5.3 筛选AtCPK10 互作蛋白的意义 | 第35-36页 |
| 6 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第40-41页 |
| 作者简介 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
