| 个人简历 | 第3-10页 |
| 致谢 | 第10-11页 |
| 中英文主要缩写略语列表 | 第11-12页 |
| 中文摘要 | 第12-22页 |
| ABSTRCT | 第22-33页 |
| 第一章 miRNA对卵巢上皮癌多药耐药相关的研究进展(综述) | 第34-59页 |
| 1 miRNA的命名、合成与功能 | 第35-37页 |
| 1.1 miRNA的命名 | 第35页 |
| 1.2 miRNA的合成及作用机制 | 第35-37页 |
| 2 miRNA与肿瘤 | 第37-39页 |
| 3 miR-200家族与肿瘤耐药 | 第39页 |
| 4 miRNA通过多种通路参与耐药 | 第39-40页 |
| 5 miRNA与卵巢癌耐药的研究 | 第40-46页 |
| 5.1 卵巢上皮癌一线治疗方案 | 第40-41页 |
| 5.2 化疗敏感与化疗耐药 | 第41页 |
| 5.3 miRNA导致卵巢上皮癌化疗耐药产生的可能机制 | 第41-46页 |
| 6 本文研究的目的和意义 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-59页 |
| 第二章 miRNA对卵巢上皮癌多药耐药相关的生物信息学分析 | 第59-83页 |
| 前言 | 第59-60页 |
| 1 材料与方法 | 第60-63页 |
| 1.1 数据集的获取和分析 | 第60页 |
| 1.2 差异miRNAs及差异表达基因的数据纳入标准 | 第60页 |
| 1.3 差异表达基因及miRNAs的生物信息学分析 | 第60-61页 |
| 1.4 细胞培养 | 第61页 |
| 1.5 实时定量PCR | 第61-63页 |
| 2 结果 | 第63-71页 |
| 2.1 符合纳入条件的芯片数据集 | 第63-64页 |
| 2.2 差异表达miRNAs及通路富集 | 第64-65页 |
| 2.3 三组mRNA芯片差异表达基因筛选及与卵巢癌耐药相关性分析 | 第65-68页 |
| 2.4 卵巢癌耐药相关差异表达miRNAs与差异表达基因相关性分析 | 第68-69页 |
| 2.5 EPHA7和P115与卵巢癌耐药相关蛋白基因互作分析 | 第69-70页 |
| 2.6 QRT-PCR验证差异表达的miRNA及mRNA的表达 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-75页 |
| 3.1 miRNA芯片GSE54665表达谱分析 | 第72页 |
| 3.2 三组mRNA芯片表达谱分析 | 第72-73页 |
| 3.3 miRNA-mRNA互作分析 | 第73-74页 |
| 3.4 EPHA7、P115蛋白互作分析 | 第74-75页 |
| 4 小结 | 第75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 第三章 卵巢上皮癌多药耐药相关lncRNA表达谱分析及与miRNA相关的ceRNA筛选 | 第83-123页 |
| 前言 | 第83-85页 |
| 1 试验方法和步骤 | 第85-95页 |
| 1.1 材料与方法 | 第85-87页 |
| 1.2 lncRNA芯片检测见第四章 | 第87-91页 |
| 1.3 lncRNA芯片数据分析及其生物信息学分析 | 第91-95页 |
| 2 实验结果 | 第95-111页 |
| 2.1 RNA质量控制 | 第95-97页 |
| 2.2 LncRNA表达谱芯片结果分析 | 第97-100页 |
| 2.3 差异表达lncRNA的生物信息学分析 | 第100-111页 |
| 3 讨论 | 第111-115页 |
| 3.1 lncRNA表达差异谱分析及功能预测 | 第111-113页 |
| 3.2 lncRNA发挥调控功能的可能机制 | 第113-115页 |
| 4 小结 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-123页 |
| 第四章 miR-429对卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞生物学功能的体外研究 | 第123-159页 |
| 前言 | 第123-124页 |
| 1 材料与方法 | 第124-128页 |
| 1.1 细胞 | 第124-125页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第125-127页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第127-128页 |
| 2. 实验方法和步骤 | 第128-141页 |
| 2.1 细胞培养 | 第128-130页 |
| 2.2 miRNA的提取、定量、纯度测定及电泳 | 第130-132页 |
| 2.3 逆转录反应合成cDNA | 第132-133页 |
| 2.4 荧光定量PCR | 第133-134页 |
| 2.5 LV-miR-NC、LV-miR-429过表达慢病毒转染SKOV3/DDP细胞 | 第134-135页 |
| 2.6 microOFFTM miR inhibitor control、microOFFTM miR-429inhibitor转染SKOV3细胞 | 第135-137页 |
| 2.7 CCK8法测细胞的IC50 | 第137-138页 |
| 2.8 CCK8测定生长曲线 | 第138-139页 |
| 2.9 细胞集落形成实验 | 第139-140页 |
| 2.10 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第140-141页 |
| 2.11 统计分析 | 第141页 |
| 3. 结果 | 第141-149页 |
| 3.1 Total RNA的提取和质量监控 | 第141-142页 |
| 3.2 SKOV3/DDP及其亲本细胞中miR-429的表达水平分析 | 第142-144页 |
| 3.3 CCK8检测SKOV3/DDP及其亲本细胞SKOV3的IC50 | 第144页 |
| 3.4 转染过表达慢病毒 | 第144-145页 |
| 3.5 转染LV-miR-429后SKOV3/DDP细胞中miR-429表达水平分析 | 第145页 |
| 3.6 CCK8检测转染LV-miR-429及LV-miR-NC后SKOV3/DDP细胞IC50 | 第145-146页 |
| 3.7 CCK8检测转染miR-429后SKOV3/DDP的增值情况 | 第146页 |
| 3.8 集落形成实验 | 第146-147页 |
| 3.9 FCM检测转染LV-miR-429和LV-miR-NC后SKOV3/DDP细胞凋亡情况 | 第147-148页 |
| 3.10 Westem Blot验证miR-429对自噬通路影响 | 第148页 |
| 3.11 CCK8检测转染miR-429 inhibitor及miR-NC后SKOV3细胞IC50 | 第148-149页 |
| 4 讨论 | 第149-152页 |
| 4.1 miRNA与肿瘤耐药 | 第149-150页 |
| 4.2 miR-429与肿瘤耐药的关系及在SKOV3/DDP细胞中的表达情况 | 第150-151页 |
| 4.3 miR-429对SKOV3/DDP细胞生物学功能影响的体外实验研究 | 第151-152页 |
| 5 小结 | 第152-153页 |
| 参考文献 | 第153-159页 |
| 第五章 miR-429的靶基因验证及双荧光素酶报告系统验证靶基因ZEB1(NM_030751)结合位点 | 第159-186页 |
| 前言 | 第159页 |
| 1 材料与方法 | 第159-164页 |
| 1.1 细胞来源 | 第159-160页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第160-162页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第162-164页 |
| 2. 实验方法和步骤 | 第164-174页 |
| 2.1 细胞培养 | 第164页 |
| 2.2 miR-429的靶基因预测 | 第164页 |
| 2.3 miR-429与ZEBl靶结合位点预测 | 第164页 |
| 2.4 细胞转染 | 第164页 |
| 2.5 Western Blot(WB,蛋白免疫印迹)验证miR-429靶蛋白的表达 | 第164-168页 |
| 2.6 oligo合成和载体构建 | 第168-171页 |
| 2.7 3'-UTR双荧光素酶报告基因表达分析 | 第171-173页 |
| 2.8 统计软件及方法 | 第173-174页 |
| 3 结果 | 第174-179页 |
| 3.1 靶基因预测情况 | 第174-176页 |
| 3.2 WB验证miR-429靶蛋白表达情况 | 第176-177页 |
| 3.3 miR-429靶结合位点 | 第177-178页 |
| 3.4 miR-429靶基因的鉴定 | 第178-179页 |
| 4 讨论 | 第179-183页 |
| 4.1 miR-429的靶基因验证 | 第180-181页 |
| 4.2 ZEB1介导耐药的可能机制 | 第181-182页 |
| 4.3 miR-429调控ZEB1的作用位点 | 第182-183页 |
| 5 小结 | 第183页 |
| 参考文献 | 第183-186页 |
| 全文小结 | 第186-188页 |
| 存在不足 | 第188-189页 |
| 后期实验计划 | 第189-190页 |
| 附录 | 第190-191页 |
