| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第17-40页 |
| 1.1 引言 | 第17-20页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第18-19页 |
| 1.1.2 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 1.1.3 项目来源与经费支持 | 第20页 |
| 1.2 国内外研究现状及评述 | 第20-36页 |
| 1.2.1 裸子植物的胚胎发育 | 第20-22页 |
| 1.2.2 针叶树体细胞胚胎发生研究进展 | 第22-25页 |
| 1.2.3 MicroRNAs与落叶松体细胞胚发生 | 第25-27页 |
| 1.2.4 植物mi R165/166 及其目标基因HD-ZIP Ⅲ的功能研究 | 第27-30页 |
| 1.2.5 生长素信号途径在植物胚胎发育中的研究 | 第30-33页 |
| 1.2.6 SSN技术在生命科学研究中的应用 | 第33-36页 |
| 1.3 研究目标和主要研究内容 | 第36-39页 |
| 1.3.1 关键的科学问题与研究目标 | 第36-37页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第37-39页 |
| 1.4 研究技术路线 | 第39-40页 |
| 第二章 过表达LaMIR166a落叶松抗性细胞系的筛选及其胚胎转化植株过程的表达分析与功能研究 | 第40-58页 |
| 2.1 材料与方法 | 第40-46页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 2.1.2 研究方法 | 第41-46页 |
| 2.2 实验结果 | 第46-54页 |
| 2.2.1 转LaMIR166a抗性细胞的筛选 | 第46-47页 |
| 2.2.2 转LaMIR166a抗性细胞系的PCR分析 | 第47-48页 |
| 2.2.3 转LaMIR166a抗性细胞系的qRT-PCR验证 | 第48-50页 |
| 2.2.4 过表达LaMIR166a对落叶松ESMs增殖的影响 | 第50页 |
| 2.2.5 过表达LaMIR166a对落叶松子叶胚发育的调控 | 第50-51页 |
| 2.2.6 落叶松子叶胚不同发育形态的解剖学观察 | 第51-52页 |
| 2.2.7 过表达LaMIR166a显著提高落叶松子叶胚萌发率 | 第52页 |
| 2.2.8 过表达LaMIR166a落叶松转化植株地上部生长性状分析 | 第52-53页 |
| 2.2.9 过表达LaMIR166a落叶松转化植株主根与侧根发生情况 | 第53-54页 |
| 2.3 讨论 | 第54-57页 |
| 2.3.1 MiR166a在落叶松体细胞胚发育中的功能 | 第54-55页 |
| 2.3.2 MiR166a与生长素/生长素极性运输可能的调控关系 | 第55-57页 |
| 2.4 小结 | 第57-58页 |
| 第三章 落叶松体细胞胚发育过程中mi R166a对IAA信号途径的调控研究 | 第58-72页 |
| 3.1 材料与方法 | 第59-61页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 3.1.2 研究方法 | 第59-61页 |
| 3.2 实验结果 | 第61-67页 |
| 3.2.1 落叶松LaNIT基因的功能分析与验证 | 第61-63页 |
| 3.2.2 过表达LaMIR166a ESMs中IAA含量及其信号途径相关基因表达分析 | 第63-64页 |
| 3.2.3 体细胞胚成熟过程中LaMIR166a、miR166a及其目标基因的表达分析 | 第64-65页 |
| 3.2.4 体细胞胚成熟过程中IAA信号途径相关基因的表达分析 | 第65-67页 |
| 3.2.5 体细胞胚发育早期IAA水平分析 | 第67页 |
| 3.3 讨论 | 第67-71页 |
| 3.3.1 植物中的NIT基因家族 | 第67-68页 |
| 3.3.2 落叶松体细胞胚发育中mi R166a对LaHDZ31–34 的调控作用 | 第68-69页 |
| 3.3.3 MiR166介导的内源IAA合成与信号转导在植物发育中的作用 | 第69-71页 |
| 3.4 小结 | 第71-72页 |
| 第四章 落叶松体细胞胚萌发过程中mi R166a调控IAA信号途径的研究 | 第72-84页 |
| 4.1 材料与方法 | 第72-74页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 4.1.2 研究方法 | 第73-74页 |
| 4.2 实验结果 | 第74-78页 |
| 4.2.1 落叶松体细胞胚萌发过程中LaMIR166a、miR166a及LaHDZ31-34 的表达分析 | 第74-75页 |
| 4.2.2 落叶松体细胞胚萌发过程中IAA信号途径相关基因的表达分析 | 第75-77页 |
| 4.2.3 外源IAA处理对落叶松体细胞胚萌发的调控 | 第77-78页 |
| 4.3 讨论 | 第78-82页 |
| 4.3.1 针叶树体细胞胚萌发能力 | 第78-79页 |
| 4.3.2 植物激素在落叶松体细胞胚萌发中的重要作用 | 第79-80页 |
| 4.3.3 MiR166/ HDZIP Ⅲ 调控落叶松体细胞胚萌发的机理 | 第80-82页 |
| 4.4 小结 | 第82-84页 |
| 第五章 过表达LaMIR166a烟草转化植株的表达与功能验证 | 第84-95页 |
| 5.1 材料与方法 | 第84-86页 |
| 5.1.1 遗传转化方法与抗性植株筛选 | 第84-85页 |
| 5.1.2 PCR与qRT-PCR检测 | 第85页 |
| 5.1.3 数据统计与收集 | 第85-86页 |
| 5.1.4 茎部切片、根部压片与显微观察 | 第86页 |
| 5.2 实验结果 | 第86-91页 |
| 5.2.1 转LaMIR166a阳性植株的筛选 | 第86-87页 |
| 5.2.2 LaMIR166a在转基因烟草不同器官中的表达分析 | 第87-88页 |
| 5.2.3 过表达LaMIR166a烟草植株表型性状分析 | 第88-89页 |
| 5.2.4 过表达LaMIR166a烟草植株木质部结构分析 | 第89-90页 |
| 5.2.5 过表达LaMIR166a烟草植株根部成熟区结构观察 | 第90-91页 |
| 5.3 讨论 | 第91-93页 |
| 5.3.1 过表达LaMIR166a促进烟草生物量积累 | 第91-92页 |
| 5.3.2 过表达LaMIR166a影响烟草器官的发育 | 第92-93页 |
| 5.4 小结 | 第93-95页 |
| 第六章 CRISPR/CAS9介导的落叶松ESMs中定向敲除LaMIR166a的研究 | 第95-103页 |
| 6.1 材料与方法 | 第96-98页 |
| 6.1.1 目标基因切割位点设计与表达载体构建 | 第96页 |
| 6.1.2 农杆菌介导的落叶松胚性细胞系的遗传转化 | 第96-97页 |
| 6.1.3 再生材料中基因组定向修饰结果检测与分析 | 第97-98页 |
| 6.2 实验结果 | 第98-100页 |
| 6.2.1 Cas9载体遗传转化与抗性细胞筛选 | 第98页 |
| 6.2.2 抗性细胞系的分子检测及其结果分析 | 第98-100页 |
| 6.3 讨论 | 第100-102页 |
| 6.3.1 SSN技术与植物mi RNAs的功能诠释 | 第100-101页 |
| 6.3.2 CRISPR/Cas9技术在落叶松miR166a定向敲除中的应用 | 第101-102页 |
| 6.4 小结 | 第102-103页 |
| 第七章 结论 | 第103-105页 |
| 7.1 结论 | 第103页 |
| 7.2 创新点 | 第103-104页 |
| 7.3 展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-122页 |
| 附录 缩略词 | 第122-125页 |
| 在读期间的学术研究 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
