| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 原核生物启动子的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 原核启动子的结构及功能 | 第9页 |
| 1.1.2 研究启动子的方法 | 第9-11页 |
| 1.1.3 启动子与RNA聚合酶交互作用以及转录启动机制 | 第11页 |
| 1.2 生物大分子交互作用的研究策略 | 第11-14页 |
| 1.2.1 表面等离子技术 | 第11-12页 |
| 1.2.2 原子力显微镜技术 | 第12-13页 |
| 1.2.3 原子力显微镜单分子力谱法 | 第13页 |
| 1.2.4 利用原子力显微镜对生物元件的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 本课题的立题意义 | 第14页 |
| 1.4 本课题的研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 本论文构建重组质粒所用的单链启动子序列 | 第16-17页 |
| 2.1.3 本论文AFM探针修饰所用的单链启动子序列 | 第17-18页 |
| 2.1.4 培养基 | 第18页 |
| 2.1.5 实验主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.6 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 食人鱼溶液的配置 | 第19页 |
| 2.2.2 AFM探针针尖的表面修饰 | 第19页 |
| 2.2.3 基底的化学修饰及固定 | 第19-20页 |
| 2.2.4 AFM液下操作 | 第20页 |
| 2.2.5 AFM力曲线基本操作 | 第20-21页 |
| 2.2.6 AFM成像及力谱分析 | 第21页 |
| 2.2.7 JM109感受态的制备与转化 | 第21页 |
| 2.2.8 质粒DNA提取 | 第21页 |
| 2.2.9 双链启动子序列的获得 | 第21页 |
| 2.2.10 启动子DNA片段和质粒DNA限制性酶切 | 第21-22页 |
| 2.2.11 DNA片段的回收 | 第22页 |
| 2.2.12 携带启动子片段的重组质粒的构建 | 第22页 |
| 2.2.13 重组大肠杆菌粗酶液的制备 | 第22页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第22页 |
| 2.2.15 CAT酶活测定 | 第22-23页 |
| 2.2.16 相关性分析方法 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-43页 |
| 3.1 用于AFM力谱分析的AFM基底及探针的修饰 | 第24-28页 |
| 3.1.1 不同基底硅烷化修饰方法效率的比较 | 第24-26页 |
| 3.1.2 基底表面RNA聚合酶蛋白浓度的优化 | 第26-27页 |
| 3.1.3 最优浓度条件下蛋白的单分子状态分析 | 第27页 |
| 3.1.4 AFM探针针尖的表面修饰 | 第27-28页 |
| 3.1.5 分析与讨论 | 第28页 |
| 3.2 启动子与RNA聚合酶体外交互作用分析方法的建立 | 第28-36页 |
| 3.2.1 基于启动子探针质粒的T7及突变启动子强度的验证 | 第28-30页 |
| 3.2.2 AFM力谱分析启动子/RNA聚合酶交互作用的实验参数优化 | 第30-31页 |
| 3.2.3 T7启动子/T7 RNA聚合酶间的交互作用 | 第31-32页 |
| 3.2.4 定点突变的T7启动子与T7 RNA聚合酶间的交互作用 | 第32-33页 |
| 3.2.5 T7启动子与RNA聚合酶解离距离的分析 | 第33-34页 |
| 3.2.6 启动子/RNA聚合酶体外交互作用参数与启动子强度的相关性分析 | 第34-35页 |
| 3.2.7 分析与讨论 | 第35-36页 |
| 3.3 基于AFM力谱分析的大肠杆菌启动子筛选及构效关系的初步验证 | 第36-43页 |
| 3.3.1 大肠杆菌启动子序列设计及获得 | 第36页 |
| 3.3.2 验证大肠杆菌 σ 亚基的决定性作用 | 第36-38页 |
| 3.3.3 分析突变大肠杆菌启动子与RNA聚合酶间的交互作用 | 第38-39页 |
| 3.3.4 基于体内酶活(CAT)的启动子强度的验证 | 第39-40页 |
| 3.3.5 大肠杆菌启动子强度与交互作用力及结合概率的相关性验证 | 第40-41页 |
| 3.3.6 大肠杆菌启动子序列特征与启动子/RNA聚合酶体外交互作用力的关联分析 | 第41-42页 |
| 3.3.7 分析与讨论 | 第42-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43-44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
