| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟病毒研究进展 | 第13-29页 |
| 1 猪瘟研究进展 | 第13-17页 |
| ·猪瘟的流行与世界分布 | 第13页 |
| ·猪瘟的临床症状 | 第13-14页 |
| ·猪瘟的诊断 | 第14-15页 |
| ·猪瘟病毒粒子结构、形态及理化特性 | 第15-16页 |
| ·猪瘟病毒的侵入及其在宿主体内的分布 | 第16页 |
| ·猪瘟病毒在宿主细胞中的繁殖过程 | 第16-17页 |
| 2 猪瘟病毒分子生物学研究进展 | 第17-19页 |
| ·猪瘟病毒的基因组结构和全序列研究概述 | 第17页 |
| ·猪瘟病毒的基因组结构 | 第17-18页 |
| ·CSFV 基因组全序列研究进展 | 第18-19页 |
| 3 猪瘟病毒基因组编码的蛋白质及其功能 | 第19-23页 |
| ·猪瘟病毒的结构蛋白及其功能 | 第20-22页 |
| ·非结构蛋白及功能 | 第22-23页 |
| 4 猪瘟病毒分子免疫学研究进展 | 第23-25页 |
| 5 猪瘟的防制策略与防制新技术的研究 | 第25-26页 |
| 6 猪瘟病毒和疫苗毒株的细胞培养 | 第26-29页 |
| 第二章 福建省猪瘟流行野毒株E2 基因序列分析 | 第29-37页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·毒株 | 第29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-34页 |
| ·提取 RNA | 第30-31页 |
| ·RT-PCR 和nPCR | 第31-34页 |
| ·反转录合成cDNA | 第31页 |
| ·PCR 和nPCR | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·纯化回收DNA 片段 | 第31-32页 |
| ·连接纯化产物与pMD18-T Vector | 第32页 |
| ·制备新鲜感受态细胞（CaCl2 法） | 第32-33页 |
| ·转化连接产物 | 第33页 |
| ·提取重组质粒 | 第33-34页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第34页 |
| ·计算机分析 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| ·PCR 鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·重组质粒PCR 及酶切鉴定结果 | 第35页 |
| ·猪瘟病毒 E2 基因核苷酸和氨基酸序列分析结果 | 第35页 |
| ·核苷酸和氨基酸序列同源性比较 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 ST 多次传代 CSFV-Shimen 株的 E2 基因序列分析 | 第37-45页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| ·CSF 脾毒 | 第37-38页 |
| ·CSF 细胞毒 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-40页 |
| ·设计与合成引物 | 第38页 |
| ·提取RNA | 第38-39页 |
| ·RT-PCR 和nPCR | 第39-40页 |
| ·反转录合成 cDNA | 第39页 |
| ·PCR 和 nPCR | 第39-40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第40页 |
| ·纯化回收目的DNA 片段 | 第40页 |
| ·连接纯化产物与PMD18-T Vector | 第40页 |
| ·制备新鲜感受态细胞 | 第40页 |
| ·转化连接产物 | 第40页 |
| ·提取重组质粒 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-42页 |
| ·目的基因的PCR 及酶切鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·目的基因序列及其氨基酸序列的比较结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论与结论 | 第42-43页 |
| ·选择E2 基因作为猪瘟病毒遗传变异检测的意义 | 第42-43页 |
| ·ST 细胞用于猪瘟病毒的培养可以较好地保持 E2 基因的遗传稳定性 | 第43页 |
| 5 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 猪瘟Shimen 株E2 基因ST 细胞表达 | 第45-52页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·质粒与细胞 | 第45页 |
| ·细胞培养试剂与酶 | 第45页 |
| ·主要仪器与设备 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-47页 |
| ·Shimen 株 E2 基因重组表达载体的构建与鉴定 | 第46页 |
| ·pEGFP-Shimen 转染 ST 细胞及筛选 | 第46页 |
| ·阳性细胞表达 E2 蛋白的免疫组化鉴定 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-49页 |
| ·猪瘟Shimen 株E2 基因的克隆鉴定结果 | 第47页 |
| ·pEGFP-Shimen 的 PCR 和酶切鉴定结果 | 第47页 |
| ·阳性细胞E2 基因的PCR 鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·阳性细胞的荧光显微镜观察结果 | 第48-49页 |
| ·阳性细胞表达E2 蛋白免疫组化鉴定结果 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| ·选择载体 | 第49页 |
| ·优化细胞转染 | 第49-50页 |
| ·优化目的基因表达 | 第50页 |
| 5 小结 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
