| 英文缩略词表 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一章 泛素样蛋白FAT10通过修饰PCNA影响DNA损伤修复 | 第16-37页 |
| 一、实验材料 | 第16-20页 |
| 1.1 细胞和药物 | 第16页 |
| 1.2 主要仪器与试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第17-20页 |
| 二、实验步骤 | 第20-25页 |
| 2.1 细胞复苏 | 第20页 |
| 2.2 细胞传代培养 | 第20页 |
| 2.3 细胞六孔板铺板 | 第20-21页 |
| 2.4 细胞的冻存 | 第21页 |
| 2.5 UV/IR辐照细胞 | 第21页 |
| 2.6 VP-16 刺激细胞 | 第21页 |
| 2.7 Western-blotting实验方法 | 第21-22页 |
| 2.8 RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.9 RNA反转为cDNA | 第23页 |
| 2.10 实时定量PCR分析 | 第23页 |
| 2.11 细胞免疫荧光 | 第23-24页 |
| 2.12 免疫共沉淀 | 第24-25页 |
| 2.13 siRNA转染 | 第25页 |
| 2.14 统计分析 | 第25页 |
| 三、实验结果 | 第25-35页 |
| 3.1 DNA损伤诱导FAT10表达 | 第25-27页 |
| 3.2 DNA损伤诱导FAT10蛋白共价修饰PCNA蛋白 | 第27-28页 |
| 3.3 FAT10介导PCNA通过 26S蛋白酶体降解 | 第28-33页 |
| 3.4 PCNA与FAT10在细胞质中共定位 | 第33-34页 |
| 3.5 FAT10共价修饰PCNA能够使细胞核聚集点数量上调 | 第34-35页 |
| 四、讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 类泛素蛋白FAT10在细胞中共价修饰 α-烯醇酶ENO1 | 第37-46页 |
| 一、材料与方法 | 第37-39页 |
| 1.1 实验材料 | 第37页 |
| 1.2 主要仪器与试剂 | 第37-38页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第38-39页 |
| 二．实验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 pFlag-CMV-eno1标签载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2 pCMV-Myc-fat10标签载体的构建 | 第40页 |
| 2.3 提质粒 | 第40页 |
| 2.4 收胶 | 第40-41页 |
| 2.5 细胞培养及质粒转染 | 第41页 |
| 2.6 免疫共沉淀 | 第41-42页 |
| 三、实验结果 | 第42-44页 |
| 3.1 pFlag-CMV-eno1质粒的构建以及序列的检测 | 第42页 |
| 3.2 pCMV-Myc-fat10质粒的构建以及序列的检测 | 第42-43页 |
| 3.3 目的蛋白在293细胞中的表达 | 第43-44页 |
| 3.4 类泛素蛋白FAT10在细胞中共价修饰ENO1 | 第44页 |
| 四、讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 总结 | 第46-49页 |
| 一、全文讨论 | 第46-47页 |
| 二、结论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 个人简历 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
