| 符号说明 | 第6-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-28页 |
| 1.1 植物RNA病毒的复制 | 第15-19页 |
| 1.1.1 病毒复制复合体生物起源 | 第15-16页 |
| 1.1.2 病毒复制复合体的组分 | 第16-19页 |
| 1.2 植物RNA病毒的移动 | 第19-23页 |
| 1.2.1 单一移动蛋白介导的核酸蛋白复合体细胞间移动 | 第20-21页 |
| 1.2.2 三基因组模块介导的核酸蛋白复合体细胞间移动 | 第21-22页 |
| 1.2.3 移动蛋白在胞间连丝形成管状结构介导病毒粒子细胞间移动 | 第22页 |
| 1.2.4 马铃薯Y病毒属病毒的细胞间移动 | 第22-23页 |
| 1.3 马铃薯Y病毒属病毒 6K1、6K2和P3N-PIPO的功能 | 第23-27页 |
| 1.4 转录组测序技术在植物病毒与寄主互作研究中的应用 | 第27-28页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-39页 |
| 2.1 植物和菌株材料 | 第28-29页 |
| 2.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.4 载体构建 | 第29-30页 |
| 2.5 RNA提取、反转录和核酸杂交 | 第30-31页 |
| 2.6 质粒小量提取 | 第31页 |
| 2.7 胶回收 | 第31页 |
| 2.8 大肠杆菌转化 | 第31-32页 |
| 2.9 农杆菌转化 | 第32页 |
| 2.10 荧光定量PCR | 第32页 |
| 2.11 体内蛋白复合体纯化 | 第32-33页 |
| 2.12 质谱分析 | 第33页 |
| 2.13 Western blot分析 | 第33-34页 |
| 2.14 酵母双杂交 | 第34-35页 |
| 2.14.1 酵母感受态制备 | 第34页 |
| 2.14.2 酵母双杂交验证两个蛋白之间的互作 | 第34-35页 |
| 2.15 免疫共沉淀 | 第35页 |
| 2.16 双分子荧光互补 | 第35-36页 |
| 2.17 化学抑制剂处理实验 | 第36页 |
| 2.18 体视荧光显微和共聚焦显微观察 | 第36-37页 |
| 2.19 病毒接种 | 第37页 |
| 2.20 病毒诱导的基因沉默 | 第37-38页 |
| 2.21 RNA沉默抑制实验 | 第38页 |
| 2.22 RNAseq数据获取及分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-88页 |
| 3.1 6K1-6K2-NbPsbO1蛋白复合体参与调控TVBMV复制 | 第39-55页 |
| 3.1.1 6K1 RSD基序的突变抑制TVBMV复制 | 第39-41页 |
| 3.1.2 TVBMV 6K2招募 6K1到病毒复制复合体 | 第41-42页 |
| 3.1.3 6K2能在体内与NbPsbO1相互作用 | 第42-44页 |
| 3.1.4 降低NbPsbO1表达抑制TVBMV复制 | 第44-46页 |
| 3.1.5 降低NbPsbO1表达抑制马铃薯Y病毒但不抑制马铃薯X病毒侵染 | 第46-48页 |
| 3.1.6 6K2蛋白Asn16、Asp23和Gly33是参与调控TVBMV复制和6K2及与NbPsbO1互作的关键位点 | 第48-53页 |
| 3.1.7 光系统II放氧复合体蛋白元件PsbP1和PsbQ1不与6K2互作且也不参与TVBMV复制 | 第53-55页 |
| 3.2 NbDREPP参与TVBMV移动并通过早期分泌途径和微丝骨架转运到胞间连丝 | 第55-73页 |
| 3.2.1 PIPO结构域的长度决定了TVBMV突变体在细胞间的移动能力 | 第55-59页 |
| 3.2.2 移动缺陷型突变体能通过突变恢复系统侵染能力 | 第59-60页 |
| 3.2.3 TVBMV P3N-PIPO和CI蛋白能与NbDREPP互作 | 第60-63页 |
| 3.2.4 NbDREPP参与了TVBMV细胞间移动 | 第63-65页 |
| 3.2.5 NbDREPP与P3N-PIPO和CI共定位于胞间连丝 | 第65-67页 |
| 3.2.6 NbDREPP能通过早期分泌途径转运到胞间连丝 | 第67-69页 |
| 3.2.7 微丝骨架和肌球蛋白XI-2 参与了NbDREPP的细胞内转运 | 第69-71页 |
| 3.2.8 早期分泌途径参与TVBMV P3N-PIPO胞间连丝定位 | 第71-73页 |
| 3.3 烟草脉带花叶病毒野生型和弱毒突变体侵染本氏烟后引起的转录组变化 | 第73-88页 |
| 3.3.1 烟草脉带花叶病毒野生型和弱毒突变体在本氏烟上引起的症状 | 第73页 |
| 3.3.2 T-WT或T-HCm侵染本氏烟的差异基因表达分析 | 第73-75页 |
| 3.3.3 差异表达基因归类 | 第75-77页 |
| 3.3.4 TVBMV的侵染抑制了光合合成反应相关基因的表达 | 第77-80页 |
| 3.3.5 TVBMV侵染改变了RNA沉默相关基因的表达 | 第80-84页 |
| 3.3.6 TVBMV的侵染改变激素信号途径相关基因的表达 | 第84-88页 |
| 4 讨论 | 第88-97页 |
| 4.1 6K1-6K2-NbPsbO1蛋白复合体调控TVBMV复制 | 第88-90页 |
| 4.2 NbDREPP参与TVBMV的移动并通过早期分泌途径和肌动肌球蛋白系统转运到胞间连丝 | 第90-95页 |
| 4.2.1 NbDREPP能与P3N-PIPO和CI共同互作促进TVBMV细胞间移动 | 第90-92页 |
| 4.2.2 NbDREPP通过早期分泌途径和肌动肌球网络定位到胞间连丝 | 第92-93页 |
| 4.2.3 TVBMV P3N-PIPO蛋白的PIPO结构域具有长度多态性 | 第93页 |
| 4.2.4 6K蛋白和P3N-PIPO蛋白介导TVBMV复制和移动的模型 | 第93-95页 |
| 4.3 TVBMV野生型和弱毒突变体侵染本氏烟后引起的转录组变化 | 第95-97页 |
| 4.3.1 T本氏烟光合合成相关基因的差异表达与T-WT引起褪绿症状形成的关系 | 第95-96页 |
| 4.3.2 T-WT和T-HCm的侵染差异调控RNA沉默 | 第96页 |
| 4.3.3 T-WT和T-HCm的侵染差异调控植物激素信号转导途径相关基因的表达 | 第96-97页 |
| 5. 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附表 | 第110-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第114页 |
