| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第14-41页 |
| 1.1 概述 | 第14-16页 |
| 1.2. 人工纳米材料及其生物毒性 | 第16-21页 |
| 1.2.1 人工纳米材料 | 第16-18页 |
| 1.2.2 人工纳米材料在水环境中的转化 | 第18-19页 |
| 1.2.3 人工纳米材料的生物毒性 | 第19-21页 |
| 1.3 细胞生物传感器及其应用 | 第21-26页 |
| 1.3.1 细胞生物传感器 | 第21-24页 |
| 1.3.1.1 启动子 | 第22-23页 |
| 1.3.1.2 报告基因 | 第23-24页 |
| 1.3.2 细胞生物传感器的应用 | 第24-26页 |
| 1.3.2.1 细菌细胞生物传感器的应用 | 第25页 |
| 1.3.2.2 动物细胞生物传感器的应用 | 第25-26页 |
| 1.4 细胞生物传感器应用于纳米毒性的检测 | 第26-27页 |
| 1.4.1 细胞生物传感器用于检测纳米材料的细胞毒性 | 第26-27页 |
| 1.4.2 细胞生物传感器用于检测纳米材料的基因毒性 | 第27页 |
| 1.5 本论文的研究意义和研究内容 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-41页 |
| 第2章 基于AP-1/BTG2/IL8启动子的双荧光报告质粒的建立 | 第41-62页 |
| 2.1 前言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第42-50页 |
| 2.2.1 构建质粒相关的试剂和仪器 | 第42-43页 |
| 2.2.2 试剂的配制 | 第43-45页 |
| 2.2.3 构建AP-1启动子基础的双荧光报告质粒 | 第45-49页 |
| 2.2.3.1 质粒pcDNA3.1+-MC的构建 | 第46-48页 |
| 2.2.3.2 质粒pcDNA3.1+-AP1-MC的构建 | 第48页 |
| 2.2.3.3 质粒Flag-CMV2-EGFP的构建 | 第48页 |
| 2.2.3.4 质粒Flag-CMV2-EGFP-AP-1-MC的构建 | 第48-49页 |
| 2.2.4 构建IL8启动子基础的双荧光报告质粒 | 第49页 |
| 2.2.4.1 质粒pcDNA3.1+-pIL8-MC的构建 | 第49页 |
| 2.2.4.2 质粒Flag-CMV2-EGFP-pIL8-MC的构建 | 第49页 |
| 2.2.5 构建BTG2启动子基础的双荧光报告质粒 | 第49-50页 |
| 2.2.5.1 质粒pcDNA3.1+-pBTG2-MC的构建 | 第49-50页 |
| 2.2.5.2 质粒Flag-CMV2-EGFP-BTG2-MC的构建 | 第50页 |
| 2.3 结果 | 第50-58页 |
| 2.3.1 重组质粒Flag-CMV2-EGFP-pAP1-MC的构建 | 第50-55页 |
| 2.3.1.1 pcDNA3.1+和pFLAG-CMV2空质粒结构图 | 第50-51页 |
| 2.3.1.2 质粒pcDNA3.1-mCherry的构建 | 第51-52页 |
| 2.3.1.3 重组质粒Flag-CMV2-EGFP的构建 | 第52-53页 |
| 2.3.1.4 重组质粒pcDNA3.1-pAP1-mCHerry的构建 | 第53-54页 |
| 2.3.1.5 重组质粒Flag-CMV2-EGFP-pAP1-MC的构建 | 第54-55页 |
| 2.3.2 重组质粒Flag-CMV2-EGFP-IL8-MC的构建 | 第55-57页 |
| 2.3.2.1 重组质粒pcDNA3.1-pIL8-mCHerry的构建 | 第55-56页 |
| 2.3.2.2 重组质粒Flag-CMV2-EGFP-IL8-MC的构建 | 第56-57页 |
| 2.3.3 重组质粒Flag-CMV2-EGFP-BTG2-MC的构建 | 第57-58页 |
| 2.3.3.1 重组质粒pcDNA3.1-pBTG2-mCherry的构建 | 第57页 |
| 2.3.3.2 重组质粒pBTG2-MC-EGFP的构建 | 第57-58页 |
| 2.4 本章总结 | 第58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 第3章 基于AP-1启动子的细胞生物传感器的优化与验证 | 第62-76页 |
| 3.1 引言 | 第62页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第62-66页 |
| 3.2.1 相关的实验材料 | 第62页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第62页 |
| 3.2.3 细胞瞬时转染 | 第62-63页 |
| 3.2.4 流式细胞技术检测传感器细胞的启动子活性 | 第63页 |
| 3.2.5 Western Blot实验检测H1299细胞内AP-1蛋白的表达 | 第63-64页 |
| 3.2.6 RT-PCR检测细胞内IL8 mRNA表达 | 第64-65页 |
| 3.2.7 细胞免疫化学法标记组蛋白H2AX的磷酸化 | 第65页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第65-66页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第66-73页 |
| 3.3.1 双荧光报告系统H1299细胞体系的建立 | 第66-67页 |
| 3.3.2 双荧光细胞生物传感器的优化 | 第67-70页 |
| 3.3.2.1 最优细胞系的选择 | 第67-68页 |
| 3.3.2.2 培养条件的优化 | 第68-69页 |
| 3.3.2.3 流式细胞技术分析策略的优化 | 第69-70页 |
| 3.3.3 双荧光报告系统H1299细胞体系的验证 | 第70-73页 |
| 3.3.3.1 H1299-API细胞体系的验证 | 第70-71页 |
| 3.3.3.2 H1299-IL8细胞体系的验证 | 第71-72页 |
| 3.3.3.3 H1299-BTG2细胞体系的验证 | 第72-73页 |
| 3.4 本章总结 | 第73-76页 |
| 第4章 双荧光细胞生物传感器在评价人工纳米材料生物毒性的应用 | 第76-88页 |
| 4.1 引言 | 第76-77页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第77-79页 |
| 4.2.1 相关的试剂和仪器 | 第77页 |
| 4.2.2 MTT实验测定细胞活力 | 第77页 |
| 4.2.3 动态水合粒径测量 | 第77-78页 |
| 4.2.4 Zeta电位测量 | 第78页 |
| 4.2.5 统计学分析 | 第78-79页 |
| 4.3 实验结果和讨论 | 第79-85页 |
| 4.3.1 碳族纳米材料对AP-1启动子活性的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.1.1 碳族纳米材料的理化特征 | 第79页 |
| 4.3.1.2 碳族纳米材料对AP-1启动子活性的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.2 金属及金属氧化物纳米材料对AP-1启动子活性的影响 | 第80-82页 |
| 4.3.2.1 金属及金属氧化物纳米材料的理化性质 | 第80-81页 |
| 4.3.2.2 金属及金属氧化物纳米材料对AP-1启动子活性的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.3 Ag NPs对AP-1,BTG2, IL8启动子活性的影响 | 第82-85页 |
| 4.3.3.1 Ag NPs的表征 | 第83页 |
| 4.3.3.2 Ag NPs对H1299细胞活力的影响 | 第83-84页 |
| 4.3.3.3 Ag NPs对H1299细胞内AP-1,BTG2,IL8启动子活性水平 | 第84-85页 |
| 4.4 本章总结 | 第85页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
| 第5章 双荧光细胞传感器在评估环境因子影响纳米材料毒性效应中的应用 | 第88-100页 |
| 5.1 前言 | 第88页 |
| 5.2 实验材料和方法 | 第88-90页 |
| 5.2.1 相关的实验材料 | 第88页 |
| 5.2.2 纳米材料的老化 | 第88页 |
| 5.2.3 老化纳米材料的毒性检测 | 第88-89页 |
| 5.2.4 纳米材料的UVA辐照处理 | 第89页 |
| 5.2.5 UVA辐照后纳米材料的毒性检测 | 第89-90页 |
| 5.2.6 纳米材料与富里酸的复合毒性 | 第90页 |
| 5.3 实验结果 | 第90-97页 |
| 5.3.1 老化后纳米材料的对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第90-93页 |
| 5.3.1.1 老化后Ag NPs的特性 | 第90-91页 |
| 5.3.1.2 老化后TiO_2 NPs的特性 | 第91-92页 |
| 5.3.1.3 老化后Ag NPs对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第92-93页 |
| 5.3.1.4 老化后TiO_2 NPs对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第93页 |
| 5.3.2 UVA辐照后纳米材料的对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第93-95页 |
| 5.3.2.1 UVA辐照对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第93-94页 |
| 5.3.2.2 UVA辐照Ag NPs 对AP-1, BTG2, IL8 启动子活性的影响 | 第94页 |
| 5.3.2.3 UVA辐照TiO_2 NPs对AP-1, BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第94-95页 |
| 5.3.3 纳米材料和富里酸共暴露对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第95-97页 |
| 5.3.3.1 Ag NPs 与富里酸共暴露对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第95-96页 |
| 5.3.3.2 TiO_2 NPs与富里酸共暴露对AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第96-97页 |
| 5.4 本章总结 | 第97页 |
| 参考文献 | 第97-100页 |
| 第6章 双荧光细胞生物传感器在评估纳米氧化钛毒性效应中的应用 | 第100-112页 |
| 6.1 引言 | 第100页 |
| 6.2 实验材料与方法 | 第100-102页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第100页 |
| 6.2.2 细胞毒性检测 | 第100-101页 |
| 6.2.3 A_L细胞内CD59基因突变检测 | 第101页 |
| 6.2.4 BTG2基因启动子基础的AL稳定细胞系的建立 | 第101-102页 |
| 6.2.5 细胞内DNA损伤检测 | 第102页 |
| 6.2.6 细胞内DNA损伤修复检测 | 第102页 |
| 6.2.7 统计分析 | 第102页 |
| 6.3 实验结果和讨论 | 第102-109页 |
| 6.3.1 TiO_2 NPs的表征 | 第102-103页 |
| 6.3.2 TiO_2 NPs的细胞毒性 | 第103-104页 |
| 6.3.3 TiO_2 NPs对细胞内AP-1,BTG2,IL8启动子活性的影响 | 第104-105页 |
| 6.3.4 TiO_2 NPs的遗传毒性 | 第105-109页 |
| 6.3.4.1 TiO_2 NPs引起的细胞内CD59基因突变 | 第105-106页 |
| 6.3.4.2 AL/BTG2稳定细胞系的建立 | 第106-107页 |
| 6.3.4.3 TiO_2NPs引起的DNA损伤及其修复 | 第107-109页 |
| 6.4 本章总结 | 第109页 |
| 参考文献 | 第109-112页 |
| 结论 | 第112-114页 |
| 博士期间完成的学术论文与取得的其他研究成果 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 附录 | 第117-121页 |
