| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-15页 |
| ·李斯特菌概述 | 第9页 |
| ·单增李斯特菌胞内感染过程 | 第9-10页 |
| ·单增李斯特菌的毒力因子 | 第10-13页 |
| ·黏附与侵袭相关因子 | 第10-12页 |
| ·细胞内感染相关因子 | 第12页 |
| ·PrfA调控子 | 第12-13页 |
| ·溶血素LLO的研究进展 | 第13-15页 |
| 第二章 单增李斯特菌溶血素LLO蛋白的原核表达、纯化及抗体制备 | 第15-25页 |
| ·试验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株及培养条件 | 第15页 |
| ·质粒、酶及试剂盒 | 第15页 |
| ·试验仪器 | 第15-16页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第16-17页 |
| ·试验方法 | 第17-22页 |
| ·大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备 | 第17页 |
| ·EGD-e溶血素LLO蛋白的原核表达载体的构建 | 第17-20页 |
| ·LLO蛋白的原核表达及纯化 | 第20-21页 |
| ·LLO多克隆抗体的制备 | 第21-22页 |
| ·试验结果 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pSL270阳性验证 | 第22页 |
| ·LLO蛋白在大肠杆菌中表达及纯化 | 第22-23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 单增李斯特菌EGD-e表面展示系统的构建 | 第25-37页 |
| ·单增李斯特菌基因敲除的原理 | 第26页 |
| ·试验材料 | 第26-27页 |
| ·菌株及培养条件 | 第26页 |
| ·质粒、酶及试剂盒 | 第26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-33页 |
| ·单增李斯特菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·EGD-e基因组的提取 | 第28页 |
| ·ΔLLO缺失株的构建 | 第28-29页 |
| ·LLO_(LPXTG)缺失株的构建 | 第29-31页 |
| ·ΔLLO缺失株和LLO_(LPXTG)缺失株回补株的构建 | 第31页 |
| ·Western blot检测 | 第31-32页 |
| ·生长曲线测定 | 第32页 |
| ·胞内增殖试验 | 第32-33页 |
| ·试验结果 | 第33-36页 |
| ·ΔLLO缺失株和LLO_(LPXTG)缺失株的验证 | 第33-34页 |
| ·重组菌株Western blot检测 | 第34页 |
| ·生长曲线测定 | 第34-35页 |
| ·胞内增殖试验 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 单增李斯特菌M7表面展示系统的构建 | 第37-48页 |
| ·试验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株及培养条件 | 第37页 |
| ·质粒、酶及试剂盒 | 第37页 |
| ·引物 | 第37-38页 |
| ·试验方法 | 第38-41页 |
| ·M7 ΔLLO缺失株的构建 | 第38页 |
| ·M7 LLO_(LPXTG)缺失株的构建 | 第38-39页 |
| ·M7 ΔLLO缺失株和LLO_(LPXTG)缺失株回补株的构建 | 第39-40页 |
| ·Western blot检测 | 第40页 |
| ·M7菌株膜蛋白的提取及Western blot检测 | 第40-41页 |
| ·生长曲线测定 | 第41页 |
| ·重组菌株溶血活性测定 | 第41页 |
| ·试验结果 | 第41-46页 |
| ·单增李斯特菌M7重组菌株的验证 | 第41-42页 |
| ·重组菌株Western blot检测 | 第42-43页 |
| ·单增李斯特菌膜蛋白的提取及Western blot检测 | 第43-45页 |
| ·生长曲线测定 | 第45页 |
| ·溶血活性测定 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 单增李斯特菌LLO关键氨基酸突变体的构建及溶血活性测定 | 第48-63页 |
| ·试验材料 | 第48-49页 |
| ·菌株及培养条件 | 第48页 |
| ·主要酶及试剂盒 | 第48页 |
| ·本试验中用到的引物 | 第48-49页 |
| ·试验方法 | 第49-54页 |
| ·LLO第 472-483位氨基酸突变蛋白的表达纯化及溶血活性测定 | 第49-51页 |
| ·LLO第 478-480位氨基酸单突变蛋白的表达纯化及溶血活性测定 | 第51-52页 |
| ·LLO第 478-480位氨基酸双突变蛋白的表达纯化及溶血活性测定 | 第52-53页 |
| ·LLO_(LPXTG)蛋白的表达纯化 | 第53-54页 |
| ·试验结果 | 第54-61页 |
| ·LLO突变体蛋白的测序验证 | 第54-57页 |
| ·LLO第 478-480位氨基酸突变蛋白的表达纯化及溶血活性测定 | 第57-58页 |
| ·LLO第 478-480位氨基酸单突变蛋白的表达纯化及溶血活性测定 | 第58-59页 |
| ·LLO第 478-480位氨基酸双突变蛋白的表达纯化及溶血活性测定 | 第59-60页 |
| ·LLO_(LPXTG)蛋白的表达纯化及溶血活性测定 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 全文总结 | 第72-73页 |
| 个人简介 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
