| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-14页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·植物NADP-ME的研究概况 | 第9-13页 |
| ·植物NADP-ME基因的克隆 | 第9-10页 |
| ·植物NADP-ME基因的转录特性 | 第10-11页 |
| ·植物NADP-ME细胞内的定位 | 第11页 |
| ·植物NADP-ME参与的生理功能 | 第11-12页 |
| ·植物NADP-ME的特性 | 第12页 |
| ·植物NADP-ME的蛋白结构及催化机制 | 第12-13页 |
| ·本课题研究的目的、主要内容及意义 | 第13-14页 |
| 2 毛果杨NADP-ME基因家族鉴定 | 第14-24页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·植物材料 | 第14页 |
| ·菌株及载体 | 第14页 |
| ·生化试剂及培养基 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-18页 |
| ·总RNA的提取 | 第15页 |
| ·总RNA浓度测定及变性电泳 | 第15-16页 |
| ·总RNA样品中基因组DNA的降解 | 第16页 |
| ·总cDNA的合成 | 第16页 |
| ·DNA样品的PCR扩增 | 第16页 |
| ·PCR扩增特异性产物胶回收 | 第16-17页 |
| ·DNA片段与pENTR/SD/D TOPO的连接 | 第17页 |
| ·大肠杆菌Top10感受态细胞的转化 | 第17页 |
| ·重组子菌落PCR鉴定 | 第17页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第17-18页 |
| ·DNA测序 | 第18页 |
| ·基因的预测 | 第18页 |
| ·DNA序列一致性比对 | 第18页 |
| ·进化树的构建 | 第18页 |
| ·结果与分析 | 第18-22页 |
| ·PtNADP-ME基因家族的鉴定 | 第18-19页 |
| ·PtNADP-ME基因家族的结构 | 第19-20页 |
| ·PtNADP-ME家族成员的序列分析 | 第20-22页 |
| ·PtNADP-ME家族成员的进化关系 | 第22页 |
| ·讨论 | 第22-24页 |
| 3 毛果杨NADP-ME基因表达分析 | 第24-29页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·溶液配制 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-25页 |
| ·毛果杨不同逆境的处理 | 第24-25页 |
| ·总RNA的提取 | 第25页 |
| ·总RNA浓度测定及变性电泳 | 第25页 |
| ·总cDNA的合成 | 第25页 |
| ·半定量RT-PCR | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·毛果杨PtNADP-ME基因家族的组织表达模式 | 第25-26页 |
| ·光对PtNADP-ME家族基因表达的影响 | 第26-27页 |
| ·机械损伤对PtNADP-ME家族基因表达的影响 | 第27页 |
| ·盐、渗透胁迫对PtNADP-ME家族基因表达的影响 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 4 毛果杨NADP-ME原核表达 | 第29-40页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·菌株和载体 | 第29页 |
| ·生化试剂 | 第29页 |
| ·缓冲液 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增 | 第30页 |
| ·DNA片段与pMD18-T载体连接 | 第30页 |
| ·双酶切 | 第30页 |
| ·目的基因与pGEX-6P-3表达载体的连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第31页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白GST标签的切除 | 第32页 |
| ·融合蛋白最适pH测定 | 第32页 |
| ·融合蛋白Km、Vmax测定 | 第32页 |
| ·不同代谢物对NADP-ME酶活性的影响 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·PtNADP-ME原核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·PtNADP-ME融合蛋白的表达 | 第33-34页 |
| ·PtNADP-ME融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白PtNADP-ME酶的最适pH鉴定 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白PtNADP-ME酶的动力学特征 | 第36-37页 |
| ·不同代谢物对PtNADP-ME融合蛋白活性的影响 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
