| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-15页 |
| ·蛋氨酸的生理功能 | 第9页 |
| ·胱硫醚-γ-合成酶(Cystathionine-γ-synthase,CGS)与蛋氨酸的合成调控 | 第9-11页 |
| ·蛋氨酸在植物体内的合成 | 第9-10页 |
| ·CGS与蛋氨酸的合成调控 | 第10页 |
| ·拟南芥CGS基因的分子结构 | 第10-11页 |
| ·转基因工程提高植物蛋氨酸含量的方法与途径 | 第11-12页 |
| ·外源基因原核表达的流程与应用领域 | 第12-13页 |
| ·外源基因基因原核表达的一般流程 | 第12页 |
| ·原核表达的应用领域 | 第12-13页 |
| ·免疫学技术在转基因植物检测中的应用 | 第13页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第13-15页 |
| 2 D-AtCGS原核表达载体的构建 | 第15-26页 |
| ·材料与方法 | 第15-23页 |
| ·实验材料 | 第15-18页 |
| ·实验载体 | 第15-17页 |
| ·菌株 | 第17页 |
| ·试剂药品及配制方法 | 第17-18页 |
| ·实验仪器 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·PUC-118-D-AtCGS中间载体的获得 | 第18-22页 |
| ·PET28a-D-AtCGS、PET32a-D-AtCGS、PGEX-4t-1-D-AtCGS原核表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·结果与分析 | 第23-25页 |
| ·PUC118-D-AtCGS中间载体的验证 | 第23页 |
| ·PET28a-D-AtCGS、PET32a-D-AtCGS、PGEX-4t-1-D-AtCGS原核表达载体的验证 | 第23-25页 |
| ·PET28a-D-AtCGS原核表达载体的验证 | 第23-24页 |
| ·PET32a-D-AtCGS原核表达载体的验证 | 第24-25页 |
| ·PGEX-4T-1-D-AtCGS原核表达载体的验证 | 第25页 |
| ·本章小结 | 第25-26页 |
| 3 At-DCGS蛋白的表达纯化与抗血清制备 | 第26-41页 |
| ·材料与方法 | 第26-35页 |
| ·实验材料 | 第26-30页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·主要化学药品 | 第26-27页 |
| ·主要药品的配制方法 | 第27-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·At-DCGS的诱导表达及SDS-PAGE电泳检测 | 第30-32页 |
| ·重组蛋白的Western blot检测 | 第32页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第32-33页 |
| ·At-DCGS重组蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·Bradford法检测蛋白的浓度检测 | 第34页 |
| ·纯化蛋白的缓冲液置换的超滤浓缩 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-40页 |
| ·PET28a-D-AtCGS、PET32a-D-AtCGS、PGEX-4t-1-D-tCGS原核表 达载体表达效率的比较 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的Western blot检测 | 第36页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第36-37页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第36-37页 |
| ·最佳诱导剂剂量的确定 | 第37页 |
| ·重组蛋白表达形式的检测 | 第37-38页 |
| ·D-AtCGS重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·包涵体的洗涤与溶解 | 第38页 |
| ·不同浓度咪唑洗洗脱液对蛋白提取的影响 | 第38-39页 |
| ·蛋白浓度的Bradford法测定 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 4 At-DCGS抗血清在转基因植物检测方面的应用 | 第41-51页 |
| ·材料与方法 | 第41-46页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·实验药品配制方法 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·AT-DCGS抗血清的免疫反应检测 | 第42-43页 |
| ·AT-DCGS抗血清的效价检测 | 第43页 |
| ·AT-DCGS抗血清IgG粗提 | 第43页 |
| ·转基因植物的PCR检测 | 第43-44页 |
| ·D-ATCGS抗血清的初步应用 | 第44-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·AT-DCGS抗血清的免疫反应检测 | 第46页 |
| ·AT-DCGS抗血清的效价检测 | 第46-47页 |
| ·AT-DCGS抗血清IgG的粗提 | 第47页 |
| ·转基因植物的PCR检测 | 第47-48页 |
| ·转基因植物的免疫学检测 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
