| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 主要英文缩略词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一部分 HIF-1α干扰表达载体的构建鉴定和稳定细胞的筛选 | 第19-52页 |
| 1 材料与方法 | 第19-36页 |
| ·材料 | 第19-24页 |
| ·细胞系 | 第19页 |
| ·载体和菌株 | 第19-20页 |
| ·抗体 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·培养基和常用试剂配制 | 第21-24页 |
| ·方法 | 第24-36页 |
| ·细胞培养 | 第24-25页 |
| ·HIF-1α蛋白稳定高表达的化学诱导 | 第25页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第25-26页 |
| ·Western blot | 第26-28页 |
| ·HIF-1α特异性shRNA表达质粒的的构建和鉴定 | 第28-31页 |
| ·pEZsiRNA6.1-hif干扰载体的构建提取和鉴定 | 第31-35页 |
| ·稳定细胞系的构建和鉴定 | 第35-36页 |
| 2 结果 | 第36-49页 |
| ·化学诱导(CoCl_2诱导)食管鳞癌细胞HIF-1α蛋白表达 | 第36-37页 |
| ·pENTR~(TM)/H1/TOhif-1α干扰载体的构建和鉴定 | 第37-41页 |
| ·siRNA和shRNA序列设计结果 | 第37-38页 |
| ·pENTR~(TM)/H1/TOhif-1α重组质粒的测序鉴定 | 第38-39页 |
| ·质粒的提取和浓度纯度的测定 | 第39页 |
| ·HIF-1α基因的诱导表达抑制效果 | 第39-41页 |
| ·pEZsiRNA6.1-hif干扰载体的构建和鉴定 | 第41-47页 |
| ·siRNA序列设计 | 第41页 |
| ·载体设计 | 第41-42页 |
| ·载体鉴定 | 第42-44页 |
| ·质粒的提取和浓度纯度的测定 | 第44页 |
| ·质粒瞬时转染Western blot鉴定 | 第44-47页 |
| ·pEZsiRNA6.1-hif-105稳定转染EC-9706细胞系的鉴定 | 第47-49页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第47页 |
| ·稳定细胞系的Western blot鉴定 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 第二部分 干扰HIF蛋白表达对食管癌细胞光动力学效应的影响 | 第52-66页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·细胞系 | 第52页 |
| ·抗体 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·仪器设备 | 第53页 |
| ·培养基和常用试剂配制 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·细胞培养 | 第54页 |
| ·HIF-1α蛋白稳定高表达的化学诱导 | 第54页 |
| ·细胞增殖实验(MTT法) | 第54页 |
| ·PDT光动力学处理和细胞存活率测定(MTT法) | 第54-55页 |
| ·PDT光动力学处理和流式细胞术检测细胞凋亡 | 第55-56页 |
| ·统计学处理 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-61页 |
| ·常氧条件干扰HIF-1α对细胞增殖的影响 | 第56-57页 |
| ·干扰HIF-1α蛋白表达对PDT光治疗后细胞存活的影响 | 第57-58页 |
| ·干扰HIF-1α蛋白表达对PDT光治疗后细胞凋亡的影响 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 综述 缺氧诱导因子-1α的调控与肿瘤发生发展 | 第69-77页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 在读期间主要成绩 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
