中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
中英文索引及缩略词表 | 第9-11页 |
前言 | 第11-15页 |
1 研究背景 | 第11-13页 |
2 国内外研究现状 | 第13页 |
3 研究目的及研究意义 | 第13-14页 |
4 研究内容 | 第14页 |
5 技术路线 | 第14-15页 |
材料和方法 | 第15-31页 |
1 实验仪器、材料和试剂 | 第15-21页 |
·实验仪器与设备 | 第15-16页 |
·实验材料 | 第16-18页 |
·细胞、菌种和质粒 | 第16-17页 |
·siRNA 及 real-time PCR 引物的合成 | 第17-18页 |
·实验试剂 | 第18-19页 |
·其他试剂的配方 | 第19-21页 |
2 实验方法 | 第21-31页 |
·细胞培养 | 第21-22页 |
·细胞培养液配制 | 第21页 |
·细胞复苏 | 第21页 |
·细胞传代 | 第21-22页 |
·脂质体介导 siRNA 瞬时转染的条件筛选 | 第22-23页 |
·real-time PCR 检测并筛选效率最高的 siRNA 片段 | 第23-25页 |
·脂质体介导 siRNA 瞬时转染 HepG2 肝癌细胞株 | 第23页 |
·siRNA 转染后细胞总 RNA 提取 | 第23页 |
·RNA 反转录反应 | 第23-24页 |
·实时定量 PCR 反应 | 第24-25页 |
·重组 siRNA-pEGFP-N3 质粒瞬时转染 HepG2 肝癌细胞株 | 第25-26页 |
·重组 siRNA-pEGFP-N3 质粒构建和克隆 | 第25-26页 |
·脂质体介导重组 siRNA-pEGFP-N3 质粒转染 HepG2 细胞 | 第26页 |
·Western blot 检测 TGFBR2 蛋白表达水平 | 第26-29页 |
·蛋白提取、制样和定量检测 | 第26-27页 |
·Western blot 检测蛋白表达水平 | 第27-29页 |
·MTT 实验检测 TGF-β1 对 HepG2 细胞增殖的影响 | 第29-30页 |
·TGF-β1 刺激实验的条件筛选 | 第29页 |
·MTT 实验检测 TGFBR2 沉默后对 HepG2 细胞增殖的影响 | 第29-30页 |
·统计学分析 | 第30-31页 |
结果 | 第31-36页 |
·lipo2000 介导 siRNA-NC-Fam 转染 HepG2 细胞 | 第31页 |
·real-time PCR 检测 siRNA 的干扰效率 | 第31-33页 |
·HepG2 细胞的总 RNA 提取 | 第31-32页 |
·各组 siRNA 沉默 TGFBR2 基因的效率 | 第32-33页 |
·siRNA-pEGFP-N3 质粒瞬时转染 HepG2 细胞 | 第33页 |
·Western blot 检测 siRNA 干扰后 TGFBR2 蛋白表达水平 | 第33页 |
·MTT 实验检测 TGF-β1 对 HepG2 细胞的增殖影响 | 第33-34页 |
·MTT 实验检测 siRNA 沉默 TGFBR2 基因后 HepG2 细胞增殖情况 | 第34-36页 |
讨论 | 第36-38页 |
结论 | 第38-39页 |
展望 | 第39-40页 |
附图 | 第40-42页 |
References | 第42-44页 |
文献综述 | 第44-56页 |
References | 第52-56页 |
致谢 | 第56-57页 |
攻读硕士学位期间取得的研究成果(含学术论文) | 第57页 |