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新蚜虫疠霉(虫霉目)共生细菌多样性研究

致谢第1-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-13页
目次第13-17页
图清单第17-18页
表清单第18-19页
1 绪论第19-32页
   ·虫霉目真菌与寄主昆虫的关系第19-23页
     ·虫霉的基本生物学特征第19-21页
     ·侵染蚜虫的虫霉目病原真菌第21-23页
   ·共生细菌与寄主关系研究第23-27页
     ·植物共生细菌研究第23-24页
     ·昆虫(动物)共生细菌研究第24-25页
     ·真菌共生细菌研究现状第25-27页
   ·微生物多样性的研究方法第27-31页
     ·传统培养法第28页
     ·细菌种群水平生理学指纹法第28页
     ·脂肪酸图谱法第28页
     ·变性梯度凝胶电泳(DGGE)第28-29页
     ·16S rRNA序列分析法第29页
     ·限制性片段多态性(RFLP)第29-30页
     ·基因芯片技术第30页
     ·荧光原位杂交(FISH)第30-31页
   ·本课题的研究内容及意义第31页
   ·论文的内容安排第31-32页
2 新蚜虫疠霉 F98028 共生细菌 16S rRNA 基因文库构建第32-43页
   ·材料第32-33页
     ·菌种第32页
     ·主要试剂第32页
     ·主要仪器第32页
     ·引物第32-33页
   ·实验方法第33-37页
     ·培养基制备及菌种准备第33页
     ·菌丝样品预处理第33页
     ·16S rRNA 文库构建第33-37页
       ·DNA 提取第33-34页
       ·共生细菌 16S rRNA 基因片段扩增第34页
       ·PCR 产物割胶回收第34-35页
       ·产物连接第35页
       ·质粒转化第35-36页
       ·阳性克隆子验证第36页
       ·RFLP 分析第36页
       ·BLAST 比对和系统发育分析第36-37页
   ·结果与分析第37-42页
     ·NaOH-Dnase 法去除菌丝体外细菌 DNA 有效性验证第37-38页
     ·新蚜虫疠霉共生细菌 16S rRNA 序列扩增结果第38页
     ·阳性克隆子 PCR 验证结果第38-39页
     ·16S rRNA 基因文库阳性克隆子 RFLP 带型分析第39-40页
     ·新蚜虫疠霉共生细菌 16S rRNA 序列比对分析第40-42页
   ·小结第42-43页
3 新蚜虫疠霉共生细菌分离鉴定与定位第43-56页
   ·材料第43-44页
     ·菌种第43页
     ·主要试剂第43页
     ·主要仪器第43页
     ·引物第43-44页
   ·实验方法第44-47页
     ·新蚜虫疠霉共生细菌的分离和鉴定第44-45页
       ·菌种准备和样品预处理第44页
       ·液体菌丝破壁及共生细菌培养第44页
       ·共生细菌的 16S rRNA 鉴定种属第44-45页
       ·共生细菌的生理生化鉴定第45页
     ·新蚜虫疠霉总 DNA 中共生细菌的特异性扩增第45-46页
       ·样品准备和 DNA 提取第45-46页
       ·可培养共生细菌的特异性扩增第46页
     ·新蚜虫疠霉共生细菌的荧光定位第46-47页
       ·菌丝样品准备第46页
       ·荧光原位杂交探针准备第46页
       ·荧光原位杂交第46-47页
   ·结果与分析第47-54页
     ·新蚜虫疠霉菌丝酶解破壁第47-48页
     ·新蚜虫疠霉共生细菌的培养和分离第48-49页
     ·共生细菌 16S rRNA 种属鉴定结果第49-50页
     ·共生细菌的生理生化鉴定结果第50页
     ·新蚜虫疠霉总 DNA 中不动杆菌特异性扩增结果第50-53页
     ·新蚜虫疠霉液体菌丝中不动杆菌的定位结果第53-54页
   ·小结第54-56页
4 不同虫霉目真菌内共生细菌 16S rRNA 基因文库的构建及相关功能研究第56-77页
   ·材料第56-57页
     ·菌种第56页
     ·主要试剂第56-57页
     ·主要仪器第57页
     ·引物第57页
   ·实验方法第57-59页
     ·不同菌种菌丝体准备第57页
     ·新蚜虫疠霉 F98028+分生孢子准备第57-58页
     ·样品预处理第58页
     ·不同差异样品 16S rRNA 文库构建第58-59页
       ·DNA 提取第58页
       ·不同差异样品内共生细菌 16S rRNA 基因片段扩增第58页
       ·PCR 产物割胶回收第58页
       ·产物连接第58页
       ·质粒转化第58页
       ·阳性克隆子验证第58-59页
       ·RFLP 分析第59页
       ·系统发育分析及多样性分析第59页
     ·新蚜虫疠霉菌株 F98028+和 F98028 对蚜虫的毒力生测第59页
   ·结果与分析第59-75页
     ·不同样品共生细菌 16S rRNA 序列扩增结果第59-60页
     ·不同样品 16S rRNA 基因文库阳性克隆子的 PCR 验证结果第60-63页
     ·不同样品共生细菌 16S rRNA 基因文库阳性克隆子 RFLP 分析第63-66页
     ·不同样品共生细菌 16S rRNA 序列比对分析第66-72页
     ·未经抗生素处理的不同虫霉样品共生细菌 16S rRNA 基因文库比较分析第72页
     ·经过抗生素处理的新蚜虫疠霉菌丝体和其分生孢子共生细菌 16S rRNA基因文库比较分析第72-73页
     ·经抗生素复壮分离前后新蚜虫疠霉菌株菌丝体中共生细菌多态性的比较和分析第73页
     ·新蚜虫疠霉菌株 F98028+和 F98028 对桃蚜 Myzus persicae 的毒力比较第73-75页
   ·小结第75-77页
5 总结第77-80页
   ·研究总结第77-78页
     ·新蚜虫疠霉共生细菌的体外分离、培养、鉴定和荧光原位杂交第77-78页
     ·新蚜虫疠霉菌株 F98028+、F98028 、5403、分生孢子 F98028+pc 和努利虫疠霉菌株 8931 共生细菌的 16S rRNA 基因文库构建与分析第78页
   ·展望第78-80页
参考文献第80-89页
作者简历第89页

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