| 前言 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 中英文缩略词对照表 | 第15-17页 |
| 第一章 NOB1 慢病毒稳定干扰细胞系的构建 | 第17-45页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·细胞株 | 第17-18页 |
| ·质粒 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-35页 |
| ·siRNA 设计 | 第20页 |
| ·DNA 合成片段 | 第20-21页 |
| ·vsh RNA 载体的构建 | 第21-22页 |
| ·新鲜感受态细胞制备和冻存 | 第22-23页 |
| ·克隆制备： | 第23-27页 |
| ·包装质粒的大量抽提和纯化 | 第27-28页 |
| ·病毒包装 | 第28-29页 |
| ·病毒的收获及浓缩 | 第29-30页 |
| ·Lentivirus 滴度测定（孔稀释法测定滴度） | 第30-31页 |
| ·NOB1 稳定干扰细胞株 LV-SHNOB1-SAOS-2 和LV-SHNOB1-U2OS 的构建 | 第31-33页 |
| ·Western Blot | 第33-35页 |
| ·实验结果 | 第35-43页 |
| ·敲减慢病毒载体 pFH-L vector 酶切结果 | 第35页 |
| ·阳性克隆 PCR 鉴定结果 | 第35-37页 |
| ·含 NOB1 目的干扰片段转染 293T 细胞典型照片 | 第37页 |
| ·病毒滴度检验结果 | 第37-39页 |
| ·NOB1 稳转干扰细胞系的构建 | 第39-43页 |
| 讨论 | 第43-45页 |
| 第二章 NOB1 在骨肉瘤中的功能解析 | 第45-63页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·细胞株 | 第46页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第46-47页 |
| ·主要仪器 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·细胞培养 | 第48页 |
| ·MTT 实验 | 第48-49页 |
| ·克隆形成实验 | 第49页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第49页 |
| ·细胞运动实验 | 第49-50页 |
| ·qPCR 实验 | 第50-52页 |
| ·统计学分析 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-59页 |
| ·NOB1 干扰抑制骨肉瘤细胞 Saos-2 的生长 | 第52-53页 |
| ·NOB1 干扰抑制骨肉瘤细胞 U2OS 的生长 | 第53-55页 |
| ·NOB1 干扰对骨肉瘤细胞 Saos-2 细胞周期的影响 | 第55-56页 |
| ·NOB1 干扰抑制骨肉瘤细胞 Saos-2 的细胞运动 | 第56-57页 |
| ·NOB1 参与骨肉瘤细胞 Saos-2 的 EMT 进程 | 第57-59页 |
| 讨论 | 第59-63页 |
| 第三章 慢病毒稳定转染骨肉瘤细胞的基因表达谱分析 | 第63-79页 |
| ·实验材料 | 第63-65页 |
| ·细胞株 | 第63-64页 |
| ·芯片 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·细胞培养 | 第65页 |
| ·总 RNA 的抽提 | 第65页 |
| ·总 RNA 质控 | 第65-66页 |
| ·总 RNA 的纯化 | 第66页 |
| ·总 RNA 的放大和标记 | 第66-67页 |
| ·芯片杂交 | 第67页 |
| ·芯片洗涤 | 第67-68页 |
| ·芯片扫描 | 第68页 |
| ·数据分析和统计学方法 | 第68页 |
| ·实验结果 | 第68-76页 |
| ·RNA 样品质检基本信息 | 第68-70页 |
| ·实验结果评估( CV 值) | 第70页 |
| ·差异表达谱分析 | 第70-71页 |
| ·差异基因的基因本体论（Gene ontology，GO）富集分析 | 第71-74页 |
| ·差异基因的通路（pathway）富集分析 | 第74-76页 |
| 讨论 | 第76-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 综述 | 第89-101页 |
| 参考文献 | 第97-101页 |
| 攻读学位期间所取得的科研成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
