油酸对奶牛乳腺上皮细胞生长影响及其转运研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1 研究意义和目的 | 第12页 |
| 2 乳腺上皮细胞原代培养现状 | 第12-14页 |
| ·细胞原代培养简介 | 第13页 |
| ·乳腺上皮细胞体外培养进展 | 第13-14页 |
| ·上皮细胞培养发展史 | 第13-14页 |
| ·乳腺上皮细胞培养方法研究 | 第14页 |
| ·乳腺上皮细胞在反刍动物中的研究 | 第14页 |
| 3 牛乳中脂肪酸的简介 | 第14-16页 |
| ·不饱和脂肪酸的定义以及主要来源 | 第14-15页 |
| ·牛乳中脂肪酸的特点 | 第15页 |
| ·牛乳中脂肪酸的来源 | 第15-16页 |
| 4 脂肪酸转运蛋白的研究进展 | 第16-23页 |
| ·长链脂肪酸跨膜运输 | 第16-17页 |
| ·脂肪酸转运蛋白 | 第17-23页 |
| ·脂肪酸转运蛋白家族 | 第17-19页 |
| ·脂肪酸转位酶 | 第19-20页 |
| ·脂肪酸结合蛋白 | 第20-21页 |
| ·小窝蛋白 | 第21-22页 |
| ·LCFA转运蛋白之间的关系 | 第22-23页 |
| ·小结 | 第23页 |
| 5 研究内容和方法 | 第23-25页 |
| 第二章 荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的原代培养 | 第25-36页 |
| 1 材料与方法 | 第25-31页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·细胞来源 | 第25页 |
| ·试剂与器材 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·试验试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·常用试验器具的消毒灭菌处理 | 第27页 |
| ·乳腺上皮细胞的原代培养 | 第27-28页 |
| ·乳腺上皮细胞的传代以及纯化 | 第28-29页 |
| ·细胞冻存及解冻 | 第29-30页 |
| ·细胞生长曲线制作 | 第30页 |
| ·细胞接种存活率 | 第30-31页 |
| 2 试验结果与分析 | 第31-35页 |
| ·不同的培养方法获取上皮细胞的效果 | 第31-32页 |
| ·不同分离纯化上皮细胞和成纤维细胞方法的比较 | 第32页 |
| ·细胞解冻后的部分生理指标观测 | 第32-33页 |
| ·细胞生长曲线 | 第33-34页 |
| ·细胞接种存活率实验结果 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 乳腺上皮细胞鉴定 | 第36-45页 |
| 1 实验材料与方法 | 第36-42页 |
| ·形态学鉴定 | 第36页 |
| ·角蛋白-18荧光鉴定 | 第36-38页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·试剂配制 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR法鉴定上皮细胞β-酪蛋白表达 | 第38-42页 |
| ·乳腺上皮细胞中RNA的抽提 | 第38-42页 |
| ·实验试剂和器材 | 第38-39页 |
| ·上皮细胞RNA的抽提方法 | 第39页 |
| ·抽提RNA反转录 | 第39-40页 |
| ·cDNA的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·DNA纯化测序 | 第41-42页 |
| 2 试验结果与分析 | 第42-44页 |
| ·上皮细胞形态学上的鉴定结果及分析 | 第42页 |
| ·角蛋白-18鉴定上皮细胞结果及其分析 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR法鉴定β-酪蛋白 | 第43-44页 |
| ·NRA抽提结果 | 第43页 |
| ·RNA电泳结果 | 第43-44页 |
| ·RNA反转录产物cDNA PCR扩增结果 | 第44页 |
| ·DNA送检测序结果 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 油酸对乳腺上皮细胞生长影响实验 | 第45-52页 |
| 1 实验材料和方法 | 第45-48页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第45页 |
| ·试剂的配制 | 第45-46页 |
| ·油酸对乳腺上皮细胞生长的影响实验方法 | 第46页 |
| ·试验设计 | 第46页 |
| ·试验方法 | 第46页 |
| ·细胞生长的最适合的油酸浓度选择 | 第46页 |
| ·上皮细胞的油酸饱和转运性测试 | 第46-47页 |
| ·试验设计 | 第46-47页 |
| ·放射性强度标准曲线制作 | 第47页 |
| ·试验方法 | 第47页 |
| ·油酸的吸收效率跟培养基中油酸浓度的关系 | 第47-48页 |
| ·膜抑制剂对油酸转运的影响 | 第48页 |
| 2 油酸对细胞生长以及转运实验结果 | 第48-51页 |
| ·油酸对上皮细胞的毒性实验结果 | 第48-49页 |
| ·上皮细胞生长最适宜的油酸添加浓度试验结果 | 第49页 |
| ·放射性强度标准曲线 | 第49页 |
| ·乳腺上皮细胞转运油酸的能力试验结果 | 第49-50页 |
| ·乳腺上皮细胞转运效率的试验结果 | 第50-51页 |
| ·膜抑制对油酸转运的影响试验结果 | 第51页 |
| 3 小结 | 第51-52页 |
| 实验总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
