| 摘要 | 第1-17页 |
| Abstract | 第17-20页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 前言 | 第22-34页 |
| 一、研究背景 | 第22-29页 |
| （一）基因治疗的概念以及目前的研究现状 | 第22页 |
| （二）非病毒载体面对的阻碍以及目前主要存在的载体形式 | 第22-23页 |
| （三）金纳米粒子作为药物及生物大分子传递系统载体 | 第23-25页 |
| （四）逐层组装技术（LayerbyLayer selfassembly, LbL） | 第25-27页 |
| （五）还原响应型（redoxresponsive）基因传递载体 | 第27-29页 |
| 二、课题设计和研究内容 | 第29-30页 |
| （一）研究目的和内容 | 第29-30页 |
| 1、研究的主要内容 | 第29页 |
| 2、研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| （二）课题创新点 | 第30页 |
| 参考文献 | 第30-34页 |
| 第一部分 逐层组装还原响应型纳米金载体核心的构建 | 第34-70页 |
| 第一节 PVP 作为保护剂的普通纳米金粒子的制备与表征 | 第35-43页 |
| 一、仪器与材料 | 第35-36页 |
| （一）仪器 | 第35页 |
| （二）材料 | 第35-36页 |
| 二、实验方法 | 第36-37页 |
| （一）PVPAuNPs 的合成 | 第36页 |
| （二）稳定性实验 | 第36-37页 |
| 1、纳米级胶体金溶液室温放置稳定性实验 | 第36页 |
| 2、考察 Na~+离子对金溶胶稳定性的影响 | 第36页 |
| 3、环境 pH 值对金溶胶稳定性的影响 | 第36-37页 |
| 三、结果与讨论 | 第37-42页 |
| （一）PVPAuNPs 的合成 | 第37-40页 |
| 1、还原剂用量的影响 | 第37-38页 |
| 2、PVP 用量的影响 | 第38-39页 |
| 3、温度的影响 | 第39-40页 |
| （二）稳定性实验 | 第40-42页 |
| 1、室温放置稳定性实验 | 第40页 |
| 2、Na~+离子对金溶胶稳定性的影响 | 第40-41页 |
| 3、环境 pH 值对金溶胶稳定性的影响 | 第41-42页 |
| 四、小结 | 第42-43页 |
| 第二节 脂质双分子层修饰的纳米金的合成以及表征 | 第43-50页 |
| 一、仪器与材料 | 第45-46页 |
| （一）仪器 | 第45页 |
| （二）材料 | 第45-46页 |
| 二、实验方法 | 第46-47页 |
| （一）DODABAuNPs 的合成 | 第46页 |
| （二）DODABAuNPs 的性状表征 | 第46页 |
| （三）考察 Na~+对 DODABAuNPs 金溶胶体系稳定性影响 | 第46页 |
| （四）考察环境 pH 对 DODABAuNPs 体系稳定性影响 | 第46-47页 |
| 三、结果与讨论 | 第47-49页 |
| （一）DODABAuNPs 的粒径及 Zeta 电位 | 第47页 |
| （二）DODABAuNPs 的性状表征 | 第47-48页 |
| （三）Na~+对 DODABAuNPs 金溶胶体系稳定性影响 | 第48页 |
| （四）环境 pH 对 DODABAuNPs 体系稳定性影响 | 第48-49页 |
| 四、小结 | 第49-50页 |
| 第三节 半胱胺修饰的金纳米粒（GOLDCYSTEAMINE）的制备及表征 | 第50-66页 |
| 一、仪器与试剂 | 第50-51页 |
| （一）仪器 | 第50页 |
| （二）材料与试剂 | 第50-51页 |
| 二、实验方法 | 第51-54页 |
| （一）AUCM 的制备及表征 | 第51页 |
| 1、AuCM 的制备 | 第51页 |
| 2、AuCM 粒子表面伯氨基团的定量及纳米粒形态表征 | 第51页 |
| （二）Na~+对 AuCM 溶液稳定性的影响 | 第51-52页 |
| （三）考察 pH 的改变对 AuCM 溶液稳定性的影响 | 第52页 |
| （四）凝胶电泳考察 AuCM 与 pDNA 结合能力实验 | 第52页 |
| （五）Hoechst 33258 荧光法测定 pDNA 的包封率 | 第52-53页 |
| 1、Hoechst 33258 测 pDNA 标准曲线的制作 | 第52-53页 |
| 2、方法精密度实验 | 第53页 |
| 3、方法回收率实验 | 第53页 |
| 4、专属性实验 | 第53页 |
| 5、pDNA 的包封率的测定 | 第53页 |
| （六）AuCM 与 AuCM/pDNA 在不同环境下电位的考察 | 第53-54页 |
| （七）化学稳定性实验（DNaseⅠ） | 第54页 |
| 三、结果与讨论 | 第54-65页 |
| （一）AuCM 的制备与表征 | 第54-56页 |
| （二）Na~+对 AuCM 溶液稳定性的影响 | 第56-57页 |
| （三）考察不同 pH 条件下对 AuCM 溶液稳定性的影响 | 第57-58页 |
| （四）凝胶阻滞实验证明 AuCM 与 pDNA 的有效结合 | 第58-60页 |
| （五）Hoechst 33258 荧光法测定 pDNA 的包封率 | 第60-63页 |
| 1、Hoechst 33258 测 pDNA 标准曲线的制作 | 第60-61页 |
| 2、方法精密度实验 | 第61-62页 |
| 3、方法回收率实验 | 第62-63页 |
| 4、专属性实验 | 第63页 |
| 5、pDNA 的包封率的测定 | 第63页 |
| （六）AuCM、AuCM/pDNA 在不同环境中 Zeta 电位 | 第63-64页 |
| （七）DNaseⅠ降解稳定性实验 | 第64-65页 |
| 四、小结 | 第65-66页 |
| 第四节 三种不同功能化金纳米粒的细胞毒性对比研究 | 第66-68页 |
| 一、仪器与试剂 | 第66页 |
| （一）仪器 | 第66页 |
| （二）材料与试剂 | 第66页 |
| 二、实验方法 | 第66-67页 |
| （一）MTT 法检测三种纳米金细胞毒性 | 第66-67页 |
| 三、结果与讨论 | 第67-68页 |
| （一）Hep G2 细胞毒性对比结果 | 第67-68页 |
| 四、小结 | 第68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 第二部分 还原响应型材料的制备与表征 | 第70-88页 |
| 第一节 基于谷胱甘肽响应型材料 SSPEI 的制备以及表征 | 第71-74页 |
| 一、仪器与试剂 | 第72页 |
| （一）仪器 | 第72页 |
| （二）材料与试剂 | 第72页 |
| 二、实验方法 | 第72页 |
| （一）SS-PEI 响应型聚阳离子材料的制备及表征 | 第72页 |
| 三、结果与讨论 | 第72-73页 |
| （一）SS-PEI 的制备及表征 | 第72-73页 |
| 四、小结 | 第73-74页 |
| 第二节 还原响应型 TAT 聚合物多肽的制备及表征 | 第74-86页 |
| 一、仪器与试剂 | 第74-75页 |
| （一）仪器 | 第74页 |
| （二）材料与试剂 | 第74-75页 |
| 二、实验方法 | 第75-77页 |
| （一）响应型二硫键修饰聚合物多肽 pTAT 的制备及表征 | 第75-76页 |
| （二）2,4,6三硝基苯磺酸（TNBs）显色反应测定 pTAT 含量方法的建立 | 第76-77页 |
| 1、TNBs 方法标准曲线的绘制 | 第76页 |
| 2、方法精密度实验 | 第76页 |
| 3、方法回收率实验 | 第76-77页 |
| （三）pTAT 与 pDNA 的结合效果验证及释放实验 | 第77页 |
| 三、结果与讨论 | 第77-86页 |
| （一）pTAT 的制备及平均相对分子质量的确定 | 第77-82页 |
| （二）2,4,6三硝基苯磺酸（TNBs）显色反应测定 pTAT 含量方法的建立 | 第82-85页 |
| 1、TNBs 方法标准曲线的绘制 | 第82-83页 |
| 2、方法精密度实验 | 第83-84页 |
| 3、方法回收率实验 | 第84-85页 |
| （三）pTAT 与 pDNA 的结合效果与释放实验 | 第85-86页 |
| 四、小结 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 第三部分 还原响应型AUCM/PDNA/PTAT/HA肝靶向给药载体系统的构建、表征及体内外实验 | 第88-124页 |
| 第一节 AUCM/PDNA/PTAT/HA 给药载体系统的设计、构建及表征 | 第89-99页 |
| 一、仪器与试剂 | 第90-91页 |
| （一）仪器 | 第90-91页 |
| （二）材料与试剂 | 第91页 |
| 二、实验方法 | 第91-92页 |
| （一）基于纳米金为核心载体的响应释放系统的设计 | 第91页 |
| （二）AuCM/ pDNA/pTAT /HA 载体的构建 | 第91-92页 |
| （三）AuCM/ pDNA/pTAT /HA 粒径分布与 zeta 电位的表征 | 第92页 |
| （四）AuCM/ pDNA/pTAT /HA 纳米复合物形态观察 | 第92页 |
| 三、结果与讨论 | 第92-98页 |
| （一）还原响应型逐层组装纳米金非病毒给药载体设计 | 第92-94页 |
| （二）AuCM/ pDNA/pTAT /HA 载体的构建 | 第94-95页 |
| （三）构建 AuCM/pDNA/pTAT/HA 载体体系粒径分布和电位表征 | 第95-96页 |
| （四）载 pDNA 纳米复合物形态观察 | 第96-98页 |
| 四、小结 | 第98-99页 |
| 第二节 AUCM/PDNA/PTAT/HA 复合物载体体外功能评价 | 第99-120页 |
| 一、仪器与试剂 | 第99-100页 |
| （一）仪器 | 第99页 |
| （二）材料与试剂 | 第99-100页 |
| 二、实验方法 | 第100-107页 |
| （一）细胞培养 | 第100-101页 |
| 1、细胞的传代 | 第100页 |
| 2、细胞的冻存 | 第100-101页 |
| 3、细胞的复苏 | 第101页 |
| （二）基于 AuCM 的纳米复合物载体的细胞毒性评价 | 第101-102页 |
| （三）COS-7 及 Hep G2 细胞 CD44 表达情况验证 | 第102页 |
| （四）响应型纳米复合物载体细胞内追踪定位实验 | 第102-103页 |
| 1、COS-7 细胞内追踪定位实验 | 第102-103页 |
| 2、Hep G2 细胞内追踪定位实验 | 第103页 |
| （五）包覆不同层的 AuCM 复合物细胞摄取的 TEM 实验 | 第103页 |
| （六）HA 竞争抑制性摄取实验 | 第103-104页 |
| （七）细胞转染实验 | 第104-107页 |
| 1、COS-7 细胞的 AuCM/pDNA/pTAT 纳米复合物 GSH 响应转染效果验证 | 第104页 |
| 2、针对 Hep G2 细胞的转染实验 | 第104-105页 |
| 3、转染效果定量 | 第105-107页 |
| 三、结果与讨论 | 第107-119页 |
| （一）细胞培养 | 第107页 |
| （二）基于 AuCM 的纳米复合物载体的细胞毒性评价 | 第107-108页 |
| （三）COS-7 及 Hep G2 细胞 CD44 表达情况验证 | 第108-109页 |
| （四）响应型纳米复合物载体细胞内追踪定位实验 | 第109-111页 |
| 1、COS-7 细胞内追踪定位实验 | 第109-110页 |
| 2、Hep G2 细胞内追踪定位实验 | 第110-111页 |
| （五）包覆不同层的 AuCM 复合物细胞摄取的 TEM 实验 | 第111-112页 |
| （六）HA 竞争抑制性摄取实验 | 第112-113页 |
| （七）细胞转染定性实验 | 第113-119页 |
| 1、针对 COS-7 细胞的 AuCM/pDNA/pTAT 纳米复合物 GSH 响应转染效果验证 | 第113-114页 |
| 2、针对 Hep G2 细胞的 AuCM/pDNA/pTAT/HA 响应转染实验 | 第114-115页 |
| 3、转染效果定量 | 第115-119页 |
| （1）BCA 含量测定试剂盒标准曲线的绘制 | 第115-116页 |
| （2）方法精密度实验 | 第116-117页 |
| （3）方法回收率实验 | 第117-118页 |
| （4）生物发光定量结果 | 第118-119页 |
| 四、小结 | 第119-120页 |
| 第三节 AUCM/PDNA/PTAT/HA 纳米复合物载体的体内研究. | 第120-123页 |
| 一、仪器与试剂 | 第121页 |
| （一）仪器 | 第121页 |
| （二）材料与试剂 | 第121页 |
| 二、实验方法 | 第121-122页 |
| 三、结果与讨论 | 第122-123页 |
| 四、小结 | 第123页 |
| 参考文献 | 第123-124页 |
| 全文总结 | 第124-125页 |
| 逐层组装技术在药物递送领域应用的研究进展 | 第125-137页 |
| References | 第133-137页 |
| 发表论文及参加科研工作情况 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
