| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·二化螟的发生与为害 | 第13页 |
| ·Bt 水稻研究概况 | 第13-14页 |
| ·Bt 毒素作用机制 | 第14-18页 |
| ·Bt 毒素受体的种类 | 第14-17页 |
| ·Bt 毒素与受体的结合 | 第17-18页 |
| ·鳞翅目昆虫对 Bt 毒素抗性的分子机制研究进展 | 第18-24页 |
| ·鳞翅目昆虫 APN 与 Bt 毒素的特异性结合 | 第18-21页 |
| ·鳞翅目昆虫 APN 变异与 Bt 抗性的关系 | 第21-22页 |
| ·RNAi 在昆虫基因功能研究中的应用 | 第22-23页 |
| ·二化螟对 Bt 毒素抗性的分子机制研究进展 | 第23-24页 |
| ·研究思路 | 第24-27页 |
| 第二章 二化螟 APNs 全长 cDNA 序列的克隆与序列特征分析 | 第27-44页 |
| ·材料与方法 | 第27-31页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·引物的设计 | 第27-29页 |
| ·二化螟 APNs 基因全长 cDNA 克隆 | 第29-31页 |
| ·二化螟 APNs 基因序列分析 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-41页 |
| ·二化螟 APN2、APN3、APN4 和 APN5 四个基因片段的克隆 | 第31-33页 |
| ·二化螟 APNs 基因 mRNA 序列分析 | 第33-41页 |
| ·结论与讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 二化螟氨肽酶 N 基因的时空表达谱分析 | 第44-53页 |
| ·材料与方法 | 第44-48页 |
| ·主要试剂及配制 | 第44-45页 |
| ·二化螟中肠氨肽酶活性测定 | 第45-46页 |
| ·内参基因的克隆 | 第46页 |
| ·荧光引物设计 | 第46页 |
| ·实时定量 PCR 检测二化螟三种内参基因相对稳定性分析 | 第46-47页 |
| ·实时定量 PCR 法检测二化螟 APNs 基因的表达谱 | 第47-48页 |
| ·数据处理 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-51页 |
| ·中肠氨肽酶在各个龄期的活性测定结果 | 第48页 |
| ·内参基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·三种内参基因相对稳定性分析 | 第49-50页 |
| ·APNs 基因在二化螟幼虫不同肠道组织及不同龄期的表达谱分析 | 第50-51页 |
| ·结论与讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 二化螟中肠 BBMV 与 Cry1A 毒素的配基结合及 APN 受体的质谱鉴定 | 第53-61页 |
| ·材料与方法 | 第53-58页 |
| ·BBMV 提取 | 第55-56页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第56-57页 |
| ·Ligand blot | 第57-58页 |
| ·HPLC/MS 质谱鉴定 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测二化螟中肠 BBMV 蛋白 | 第58页 |
| ·Ligand blot 分析 Cry1Ab 毒素与二化螟中肠 BBMV 配基结合 | 第58-59页 |
| ·HPLC-MS 质谱鉴定结果 | 第59页 |
| ·结论与讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 抗体封闭技术鉴定二化螟 APN 为 Cry1A 毒素受体 | 第61-71页 |
| ·材料与方法 | 第61-67页 |
| ·氨肽酶 N 抗体的制备 | 第61-65页 |
| ·抗血清效价检测 | 第65-66页 |
| ·抗体的特异性检测 | 第66页 |
| ·抗血清和抗体与 BBMV 的 ELISA 结合 | 第66页 |
| ·抗体封闭后二化螟初孵幼虫对 Cry1Ab 敏感性生测 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-69页 |
| ·抗血清的剂量反应 | 第67页 |
| ·抗体的特异性检测 | 第67-68页 |
| ·抗血清和抗体与 BBMV 的结合 | 第68页 |
| ·抗体封闭后二化螟初孵幼虫对 Cry1Ab 敏感性生测 | 第68-69页 |
| ·结论与讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 RNAi 技术验证二化螟中肠氨肽酶 N 基因的功能 | 第71-84页 |
| ·材料与方法 | 第71-76页 |
| ·技术路线 | 第71-72页 |
| ·二化螟 RNA 干扰体系的建立 | 第72-73页 |
| ·qPCR 和 RT-PCR 基因水平检测干扰效率 | 第73-75页 |
| ·Western blot 和测定氨肽酶活性检测干扰后氨肽酶的沉默 | 第75页 |
| ·RNA 干扰后二化螟对 Cry1Ab 毒素的敏感性测定 | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-82页 |
| ·注射对二化螟 3 龄幼虫死亡率的影响 | 第76页 |
| ·探针可靠性验证 | 第76-78页 |
| ·qPCR 和 RT-PCR 检测干扰效率 | 第78-79页 |
| ·Western blot 和测定氨肽酶活性检测干扰后氨肽酶的表达 | 第79-80页 |
| ·RNA 干扰后二化螟对 Cry1Ab 毒素的敏感性测定 | 第80-81页 |
| ·二化螟 3 龄幼虫对 Cry1Ab 毒素的体重抑制率 | 第81-82页 |
| ·结论与讨论 | 第82-84页 |
| 第七章 全文结论 | 第84-88页 |
| 参考文献 | 第88-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简历 | 第101页 |
