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拟南芥冷敏感突变体chs1相关基因的克隆和功能分析

摘要第1-5页
Abstract第5-6页
目录第6-10页
缩略词表第10-11页
第一章 文献综述第11-32页
   ·低温对植物的影响第11-13页
     ·低温对植物的危害第12页
     ·冷驯化第12-13页
   ·植物响应低温的信号通路第13-22页
     ·植物对低温的感知第13页
     ·低温相关的钙离子信号通路第13-15页
     ·依赖于CBF的信号途径第15-16页
     ·不依赖于CBF的信号途径第16-18页
     ·低温信号途径中的转录后调控第18-19页
     ·低温信号途径中的翻译后调控第19-20页
     ·部分植物激素与低温的关系第20-22页
   ·植物的防卫反应第22-29页
     ·植物的免疫系统第22-23页
     ·植物的R蛋白第23-25页
     ·TIR-X和TIR-NB蛋白第25-27页
     ·CC-X和CC-NB蛋白第27-29页
   ·温度对免疫反应的调节第29-31页
     ·温度对植物的免疫反应的影响第29-30页
     ·温度对R蛋白亚细胞定位的影响第30页
     ·SA与ABA对免疫反应的影响第30-31页
   ·本研究的目的和意义第31-32页
第二章 实验材料和方法第32-45页
   ·实验材料第32-33页
     ·植物材料第32页
     ·菌株材料第32页
     ·主要载体第32-33页
     ·主要工具酶与试剂第33页
   ·实验仪器、培养基和试剂配制第33-37页
     ·主要培养基配制第33-34页
     ·转化拟南芥试剂第34页
     ·抗生素配制第34页
     ·烟草瞬时表达注射悬浮液第34页
     ·Western blot试剂第34-36页
     ·实验仪器第36-37页
     ·其它常用溶液配制第37页
     ·植物材料培养基质第37页
   ·实验方法第37-45页
     ·植物材料培养第37页
     ·植物基因组DNA提取第37-38页
     ·植物总RNA的提取第38页
     ·反转录第38页
     ·实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)第38-39页
     ·拟南芥离子渗漏率测定第39页
     ·台盼蓝(Trypan blue)染色第39页
     ·DAB染色第39页
     ·SA提取和测定第39-40页
     ·拟南芥转基因第40页
     ·PCR扩增第40页
     ·PCR和酶切产物回收第40-41页
     ·质粒DNA提取第41-42页
     ·质粒和连接产物的热击转化第42页
     ·大肠杆菌超级感受态的制备第42页
     ·农杆菌感受态的制备第42页
     ·电击转化农杆菌感受态第42-43页
     ·本实验所用到的载体构建第43页
     ·植物蛋白提取第43页
     ·Western blot第43页
     ·拟南芥原生质体瞬时表达系统第43-44页
     ·chs1-2的EMS诱变第44-45页
第三章 实验结果与分析第45-77页
   ·突变体chs1-2的性状分析第45-49页
     ·chs1-2的冷敏感表型分析第45-46页
     ·chs1-2的细胞死亡和活性氧积累第46-48页
     ·chs1-2的PR基因表达状况和水杨酸的积累第48-49页
   ·突变体chs1-2活性氧相关基因的表达第49-50页
   ·CHS1的图位克隆第50-59页
     ·CHS1的定位与生物信息学分析第50-51页
     ·CHS1的基因组互补第51-55页
     ·冷敏感突变体chs1具有剂量依赖效应第55-57页
     ·CHS1基因内抑制子回复突变体chs1-2的冷敏感表型第57-59页
   ·CHS1的表达模式分析第59-61页
     ·CHS1的组织表达模式第59-60页
     ·CHS1的亚细胞定位第60-61页
   ·过表达CHS1-TIR和CHS1-NB结构域植株的表型和性状分析第61-65页
     ·过表达CHS1-TIR和CHS1-NB结构域植株的表型分析第61-63页
     ·过表达CHS1-TIR和CHS1-NB结构域植株的细胞死亡和过氧化氢积累分析第63-64页
     ·过表达CHS1-TIR和CHS1-NB结构域植株PR基因的表达分析第64-65页
   ·CHS1下游调控因子的分析第65-67页
     ·chs1-2的冷敏感表型部分依赖于SA第65页
     ·chs1-2的冷敏感表型完全依赖于EDS1或PAD4第65-67页
   ·CHS1的稳定性分析第67-72页
     ·CHS1转录水平稳定性分析第67-68页
     ·CHS1蛋白的稳定性分析第68-69页
     ·CHS1 TIR和NB结构域的稳定性分析第69页
     ·高温对CHS1、TIR和NB结构域的影响第69-70页
     ·CHS1-TIR的降解不依赖于26S蛋白酶体途径第70-72页
   ·CHS1抑制子的筛选第72-77页
     ·chs1-2回复突变体的筛选第72-75页
     ·SOC1的图位克隆第75-77页
第四章 讨论与展望第77-82页
   ·突变蛋白chs1没有改变CHS1的亚细胞定位第77页
   ·突变体chs1的冷敏感表型可能有TIR-NB-LRR类型R蛋白的参与第77页
   ·突变体chs1是一个隐性功能有缺陷的突变体第77页
   ·CHS1的转录后水平受到温度的调控第77-78页
   ·CHS1是植物生长动态平衡的调节子第78页
   ·CHS1可能的工作模型第78-80页
   ·不同研究组对CHS1功能研究的比较第80-81页
     ·CHS1的表达模式第80页
     ·CHS1的亚细胞定位第80页
     ·chs1的冷敏感表型与SA的关系第80-81页
   ·展望第81-82页
第五章 结论第82-83页
   ·结论第82-83页
参考文献第83-99页
附录第99-101页
致谢第101-103页
个人简历第103页

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