| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-12页 |
| 第2章 实验材料、仪器与试剂 | 第12-16页 |
| ·细胞与组织芯片 | 第12页 |
| ·主要仪器 | 第12-13页 |
| ·主要试剂 | 第13-16页 |
| 第3章 实验方法 | 第16-28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第16-18页 |
| ·细胞培养主要试剂的配制 | 第16页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR 所需试剂和溶液的配制 | 第16页 |
| ·免疫印迹主要试剂的配制 | 第16-18页 |
| ·原位杂交主要试剂的配制 | 第18页 |
| ·细胞培养 | 第18-20页 |
| ·细胞复苏 | 第18-19页 |
| ·细胞传代 | 第19页 |
| ·细胞冻存 | 第19页 |
| ·细胞计数 | 第19-20页 |
| ·miRNA 提取、逆转录与实时荧光定量-PCR | 第20-21页 |
| ·miRNA 提取 | 第20页 |
| ·miRNA 逆转录 | 第20页 |
| ·实时荧光定量-PCR | 第20-21页 |
| ·组织芯片 miR-200c 原位杂交 | 第21-22页 |
| ·细胞转染 miR-200c 模拟物 | 第22-23页 |
| ·转染细胞株的总 RNA 提取及 mRNA 表达谱生物芯片操作 | 第23-24页 |
| ·总 RNA 提取 | 第23页 |
| ·mRNA 表达谱芯片分析 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR 检测肿瘤细胞 ZEB1 基因的 mRNA 表达 | 第24-25页 |
| ·免疫印迹检测转染细胞株 ZEB1 基因的蛋白表达 | 第25-27页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第25页 |
| ·蛋白变性 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第25页 |
| ·转膜 | 第25-26页 |
| ·免疫反应 | 第26页 |
| ·半定量分析 | 第26-27页 |
| ·miR-200c 调控的基因网络与信 号通路分析 | 第27页 |
| ·miR-200c 预测靶蛋白 EDNRA 的免疫组化分析 | 第27页 |
| ·统计处理 | 第27-28页 |
| 第4章 实验结果 | 第28-36页 |
| ·miR-200c 在乳腺细胞株与乳腺疾病组织芯片中的表达 | 第28-30页 |
| ·miR-200c 在乳腺细胞株中的表达 | 第28-29页 |
| ·miR-200c 的原位杂交分析 | 第29-30页 |
| ·miR-200c 调控基因的筛选 | 第30-36页 |
| ·miR-200c mimic 转染细胞株 mRNA 表达谱的分析 | 第30-32页 |
| ·miR-200c mimic 转染细胞株 ZEB1 基因 mRNA 及蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·miR-200c 调控的基因网络与信号通路分析 | 第33-34页 |
| ·miR-200c 预测靶蛋白 EDNRA 的免疫组化分析 | 第34-36页 |
| 第5章 实验讨论 | 第36-42页 |
| ·建立筛选乳腺癌恶性表型相关 miR-200c 调控的基因网络方法的意义 | 第36-39页 |
| ·原位杂交方法在阐明 miRNA 作用的有效性 | 第39-42页 |
| 第6章 结论与展望 | 第42-43页 |
| ·结论 | 第42页 |
| ·下一步工作计划 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第49-50页 |
| 综述 | 第50-61页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
