| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 第一节 TAL 效应子应用研究进展 | 第12-16页 |
| 1 TALE 与 DNA 识别的分子密码 | 第12-13页 |
| 2 人工 TALEs 构建 | 第13-14页 |
| 3 TALEs 与锌指（ zinc finger，ZF）模块比较 | 第14页 |
| 4 TALEs 应用 | 第14-15页 |
| 5 TALENs 对基因组编辑的影响 | 第15-16页 |
| 第二节 “Golden Gate”克隆法 | 第16-20页 |
| 1 “GoldenGate”克隆法简介 | 第16-17页 |
| 2 “Golden Gate”克隆法的原理 | 第17页 |
| 3 “Golden Gate”克隆法的设计 | 第17-18页 |
| 4 “Golden Gate”克隆法的优点 | 第18页 |
| 5 “Golden Gate”克隆法的不足 | 第18-20页 |
| 第二章 实验研究 | 第20-51页 |
| 第一节 应用“Golden Gate”克隆法构建 TALEs | 第20-29页 |
| 1 材料与方法 | 第20-25页 |
| ·材料与试剂 | 第20页 |
| ·TALE构建程序 | 第20-21页 |
| ·TALE靶点识别序列的确定 | 第21-22页 |
| ·RVD 片段扩增 | 第22页 |
| ·环形 6 聚体的组装 | 第22-23页 |
| ·非环形片段消化降解 | 第23页 |
| ·线性 6 聚体的扩增 | 第23-24页 |
| ·真核表达质粒组装 | 第24页 |
| ·质粒转化 | 第24-25页 |
| ·TALE质粒的筛选 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-29页 |
| ·RVD 单体扩增 | 第25-26页 |
| ·环形 6 聚体组装 | 第26-27页 |
| ·线性 6 聚体扩增 | 第27-28页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29页 |
| 第二节 绵羊 FGF5 基因 TALEN 质粒对活性检测 | 第29-38页 |
| 1 材料与方法 | 第30-33页 |
| ·材料与试剂 | 第30页 |
| ·除内毒素 TALEN 质粒对及 pmaxGFP 质粒的制备 | 第30页 |
| ·绵羊成纤维细胞的培养 | 第30页 |
| ·TALEN 质粒对的电转染 | 第30-31页 |
| ·用 Surveyor nuclease 试剂盒检测 TALEN 活性 | 第31-33页 |
| ·细胞筛选 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-37页 |
| ·绵羊成纤维细胞电转染结果 | 第33-34页 |
| ·SDS -PAGE 检测 TALEN 质粒对活性 | 第34-35页 |
| ·细胞筛选结果 | 第35-36页 |
| ·测序结果 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 第三节 应用“Golden Gate”克隆法构建靶向载体 | 第38-51页 |
| 1 材料与方法 | 第38-44页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·小鼠基因组抽提 | 第39页 |
| ·小鼠β酪蛋白基因第一和第八外显子两端同源臂序列扩增 | 第39页 |
| ·同源臂序列与 T 载体连接 | 第39-40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·同源重组靶向载体目的片段 PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·中间载体 pEGFP-N1-BsmBI 构建 | 第41-43页 |
| ·“Golden Gate”克隆法组装同源重组靶向载体 | 第43-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-50页 |
| ·同源重组靶向载体目的片段 PCR 扩增结果 | 第44-45页 |
| ·中间载体 pEGFP-N1-BsmBI 鉴定 | 第45-46页 |
| ·反应系统中缓冲液对酶活性影响分析及载体组装 | 第46-47页 |
| ·重组靶向载体菌落 PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组靶向载体 pEGFP -N1-mE1-HR 和 pEGFP-N1-mE8-HR 的酶切鉴定 | 第48页 |
| ·重组靶向载体测序结果 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 全文结论 | 第51页 |
| 创新点 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 导师评阅表 | 第58页 |
