| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-21页 |
| 1 引言 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·试验对象 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| ·菌株及载体 | 第23-24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·分析工具软件 | 第24页 |
| ·牛 DNA 的提取及检测 | 第24-25页 |
| ·牛基因组 DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·DNA 浓度和纯度的检测 | 第25页 |
| ·引物设计和 PCR 扩增及检测 | 第25-27页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·最佳 PCR 扩增体系 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·RFLP 分析 | 第27页 |
| ·牛 GPR54 基因 5’端序列克隆和测序 | 第27-30页 |
| ·PCR 产物的快速纯化 | 第27页 |
| ·双酶切反应 | 第27-28页 |
| ·双酶切产物的纯化 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备---氯化钙法 | 第28页 |
| ·PCR 产物与载体连接 | 第28页 |
| ·转化 | 第28-29页 |
| ·质粒 DNA 的小量提取----试剂盒法 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·报告基因 | 第30-31页 |
| ·293T 细胞培养及传代 | 第30-31页 |
| ·细胞铺板及细胞转染 | 第31页 |
| ·细胞转染效率检测 | 第31页 |
| ·数据分析 | 第31-34页 |
| ·基因型频率 | 第31页 |
| ·基因频率 | 第31-32页 |
| ·基因位点 Hardy-Weinberg 平衡状态的检验 | 第32页 |
| ·杂合度 | 第32页 |
| ·有效等位基因数 | 第32页 |
| ·多态信息含量 | 第32-33页 |
| ·方差分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·DNA 提取 | 第34页 |
| ·目的片段的同源性分析 | 第34-36页 |
| ·目的片段转录因子绑定位点分析 | 第36-37页 |
| ·牛 GPR54 基因 5’侧翼区的 SNP | 第37-38页 |
| ·C816T 和 T754C 在牛群中的分布 | 第38-39页 |
| ·SNP 位点的群体特性参数 | 第39页 |
| ·变异对转录因子结合位点的影响 | 第39-40页 |
| ·GPR973 的启动子效率比较 | 第40页 |
| ·GPR973 变异与牛初情期的关联性 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-46页 |
| ·GPR54 基因 5’侧翼区的多态性 | 第41页 |
| ·启动子和 GC 岛甲基化与 GPR54 基因的转录表达 | 第41-42页 |
| ·潜在转录因子与 GPR54 基因的转录表达 | 第42-44页 |
| ·影响实验技术和研究方法的因素 | 第44-46页 |
| ·PCR 引物 | 第44-45页 |
| ·PCR 反应 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 个人简介 | 第55页 |