| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 英文缩略语 | 第11-16页 |
| 第一部分 前言 | 第16-24页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第二部分 实验部分 | 第24-67页 |
| 第一章 荧光素酶表达质粒 pEE14.1-luc 和 pSVK-luc 的构建与表达 | 第24-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·菌株与载体 | 第24页 |
| ·化学试剂和酶 | 第24-25页 |
| ·实验动物和主要仪器设备 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-34页 |
| ·pSVK-luc、pEE14.1-luc 重组质粒的构建与鉴定 | 第25-30页 |
| ·pSVK-luc 重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·PCR 回收产物与 pMDl8-simple-T 载体的连接反应 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·大肠杆菌(E. coil)DH5α的转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒 pMD18-simple-T-luc 的筛选与鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒 pMD18-simple-T-luc 的菌液 PCR 鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒 pMD18-simple-T-luc 的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒 pMD18-simple-T-luc 的 DNA 测序分析 | 第29页 |
| ·重组质粒 pSVK-luc 的构建 | 第29-30页 |
| ·基于塞姆利基森林病毒复制子载体 pSVK 空载体的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒 pSVK-luc 构建 | 第30页 |
| ·重组表达质粒 pSVK-luc 的转化和鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒 pEE14.1-luc 的构建 | 第30-34页 |
| ·荧光素酶基因片段（luc）的获得 | 第30-32页 |
| ·荧光素酶基因（luc）片段与 pEE14.1 载体的连接 | 第32-34页 |
| ·体外检测荧光素酶基因的表达 | 第34-37页 |
| ·293T 细胞的培养与转染 | 第34-35页 |
| ·293T 细胞的传代培养 | 第34页 |
| ·293T 细胞的培养与转染 | 第34-35页 |
| ·western blot 检测 pSVK-luc、pEE14.1-luc 在细胞内表达的检测 | 第35-36页 |
| ·流式细胞术及免疫荧光法体外检测荧光素酶基因的表达 | 第36-37页 |
| ·活体成像技术检测重组质粒 pSVK -luc、pEE14.1-luc 活体内表达 | 第37-39页 |
| ·免疫用质粒 pSVK -luc、pEE14.1-luc、pGL3-CMV 的大量提取 | 第37-38页 |
| ·动物免疫方案 | 第38-39页 |
| 2. 结果 | 第39-44页 |
| ·荧光素酶基因 luc 的克隆 | 第39页 |
| ·荧光素酶基因 luc 片段的回收 | 第39页 |
| ·重组质粒 pMD18-sample-T-luc 的鉴定 | 第39-41页 |
| ·重组质粒 pMD18-sample-T-luc 的 PCR 鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组 pMD18-sample-T-luc 载体的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒 DNA pMD18-sample-T-luc 的测序分析 | 第40-41页 |
| ·塞姆利基森林病毒复制子载体（pSVK 空载体）的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 的 PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组 pSVK-luc 载体的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 的测序鉴定 | 第42页 |
| ·Western blot 体外检测荧光素酶基因的表达 | 第42-43页 |
| ·流式细胞术、免疫荧光体外检测荧光素酶基因的表达 | 第43-44页 |
| ·流式细胞术检测荧光素酶基因的表达 | 第43页 |
| ·免疫荧光法体外检测荧光素酶基因的表达 | 第43-44页 |
| ·活体成像技术检测重组质粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 体内表达 | 第44页 |
| 3. 讨论 | 第44-47页 |
| 参考文献 | 第47-48页 |
| 第二章 低电压电穿孔体内递送疫苗质粒条件的初步研究 | 第48-58页 |
| 1、材料与方法 | 第48-52页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·质粒、实验动物及主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·pGL3-CMV，pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 质粒的转化 | 第48-49页 |
| ·pGL3-CMV，pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 质粒的大量提取 | 第49-50页 |
| ·重组质粒 pGL3-CMV、pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·动物实验分组及 DNA 免疫策略 | 第51页 |
| ·Xenogen 成像系统检测萤光素酶在小鼠体内的表达 | 第51-52页 |
| ·苏木精-伊红（HE）染色检测 BALB/c 小鼠大腿肌肉纤维结构 | 第52页 |
| ·统计学处理 | 第52页 |
| 2．结果 | 第52-54页 |
| ·重组质粒 pGL3-CMV，pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·荧光素酶基因小鼠股四头肌内的表达量检测 | 第52-53页 |
| ·苏木精-伊红（HE）染色法检测 BALB/c 小鼠大腿肌肉纤维结构 | 第53-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 第三章 低电压体内递送乙肝 DNA 疫苗的初步药效学分析 | 第58-67页 |
| 1 材料和方法 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·质粒及实验动物 | 第58页 |
| ·主要试剂及检测试剂盒 | 第58页 |
| ·主要的仪器设备 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-62页 |
| ·免疫用质粒的大量提取与纯化 | 第59页 |
| ·实验动物分组及免疫策略 | 第59页 |
| ·乙肝治疗性疫苗 pVAX-HBVA、pSVK-HBVA 的免疫活性研究 | 第59-62页 |
| ·ELISA 定量检测 BALB/c 小鼠血清中抗 HBcAg 抗体 | 第59-60页 |
| ·ELISPOT 检测 BALB/c 小鼠 IFN-γ分泌细胞数 | 第60-62页 |
| ·免疫小鼠脾脏单细胞悬液的制备 | 第60页 |
| ·ELISPOT 法检测免疫小鼠脾细胞 IFN-γ分泌细胞数 | 第60-61页 |
| ·CCK-8 法检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖 | 第61-62页 |
| ·统计学处理 | 第62页 |
| 3. 结果 | 第62-64页 |
| ·ELISA 定量检测 BALB/c 小鼠血清中抗 HBcAg 抗体 | 第62页 |
| ·ELISPOT 检测免疫小鼠 IFN-γ分泌细胞数 | 第62-63页 |
| ·CCK8 检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-67页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第67-69页 |
| 第四部分 附录 | 第69-72页 |
| 附录一 硕士期间参加的研究课题和发表论文 | 第69-70页 |
| 附录二 个人简历 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
