| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-30页 |
| ·ABE发酵历史 | 第13页 |
| ·生物丁醇的研究进展 | 第13-20页 |
| ·丙酮丁醇梭菌ABE发酵面临的挑战 | 第20-25页 |
| ·原料利用 | 第21-22页 |
| ·丁醇浓度、转化率和产率 | 第22-24页 |
| ·溶剂提取回收 | 第24-25页 |
| ·辅因子工程：代谢工程改造的重要工具 | 第25-28页 |
| ·能量调控在微生物代谢中的作用 | 第25-27页 |
| ·氧化还原力调控在微生物代谢中的作用 | 第27-28页 |
| ·本学位论文的主要内容 | 第28-30页 |
| 第二章 丙酮丁醇梭菌能量代谢扰动 | 第30-49页 |
| ·介绍 | 第30-31页 |
| ·材料与方法 | 第31-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第31-32页 |
| ·本章所用引物 | 第32页 |
| ·常用培养基和抗生素 | 第32-33页 |
| ·菌株培养及保藏条件 | 第33页 |
| ·大肠杆菌化转感受态细胞制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌电转感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·丙酮丁醇梭菌基因组的提取 | 第34-35页 |
| ·表达载体构建 | 第35-36页 |
| ·质粒甲基化修饰 | 第36页 |
| ·丙酮丁醇梭菌感受态细胞的制备及转化 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白表达 | 第37-39页 |
| ·HPLC检测方法 | 第39页 |
| ·批式ABE发酵 | 第39页 |
| ·胞内核苷酸水平检测 | 第39-40页 |
| ·氧化还原电势(ORP)的检测 | 第40页 |
| ·通量平衡分析 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-47页 |
| ·F_1亚基的表达对胞内能荷的影响 | 第41-43页 |
| ·能荷水平的降低对丙酮丁醇梭菌细胞生长和糖代谢流的影响 | 第43-44页 |
| ·能荷水平的降低改变了丙酮丁醇梭菌ABE代谢特点 | 第44-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 丙酮丁醇梭菌ABE发酵向IBE发酵的转变 | 第49-60页 |
| ·介绍 | 第49-50页 |
| ·材料与方法 | 第50-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第50-51页 |
| ·本章所用引物 | 第51页 |
| ·表达质粒psADH的构建 | 第51页 |
| ·体外酶活分析 | 第51页 |
| ·GC-MS检测方法 | 第51-52页 |
| ·代谢流分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-58页 |
| ·次级醇脱氢酶在丙酮丁醇梭菌Rh8中的活性表达 | 第52-54页 |
| ·丙酮丁醇梭菌Rh8(psADH)在CGM培养基中的发酵分析 | 第54-55页 |
| ·次级醇脱氢酶的表达增加了丙酮丁醇梭菌Rh8(psADH)酸吸收速率,导致了还原力的重新分布 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 氧化还原力在丙酮丁醇梭菌醛/醇脱氢酶系统中的再分配 | 第60-84页 |
| ·介绍 | 第60-61页 |
| ·材料与方法 | 第61-70页 |
| ·菌株和质粒 | 第61-62页 |
| ·本章所用引物 | 第62-64页 |
| ·L1.1trB二型内含子插入位点预测 | 第64页 |
| ·Ⅱ型内含子插入失活质粒的构建 | 第64-66页 |
| ·丙酮丁醇梭菌突变体的筛选 | 第66-67页 |
| ·Southren blot分析 | 第67-70页 |
| ·结果 | 第70-81页 |
| ·Ⅱ型内含子插入失活突变体菌株的构建 | 第70-71页 |
| ·突变体菌株的代谢分析 | 第71-81页 |
| ·讨论 | 第81-84页 |
| 第五章 结论和展望 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-99页 |
| 附件1 二型内含子插入位点预测程序代码 | 第99-105页 |
| 附件2 丙酮丁醇梭菌代谢化学计量通路 | 第105-106页 |
| 附件3 pMTL008质粒序列 | 第106-113页 |
| 个人简介 | 第113-114页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
