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基于HPPRRSV N蛋白的快速免疫检测方法的建立与应用

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
引言第10-11页
1 文献综述第11-27页
   ·PRRSV 病原学第11-19页
     ·PRRSV 一般特征第11-12页
     ·PRRSV 的非结构蛋白与结构蛋白及其特征第12-19页
   ·PRRSV 免疫学第19-23页
     ·靶细胞以及 PRRSV 的细胞受体第19页
     ·对于 PRRSV 的先天性免疫第19-22页
     ·对 PRRSV 的适应性免疫第22-23页
   ·诊断方法第23-27页
     ·临床诊断第23-24页
     ·病毒分离第24页
     ·血清学检测第24-26页
     ·分子生物学诊断技术第26-27页
2 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 N 蛋白的表达和纯化第27-35页
   ·材料与方法第27-32页
     ·材料第27-30页
     ·方法第30-32页
   ·结果第32-34页
     ·BL21(DE3)(pET-N)中重组质粒双酶切结果第32-33页
     ·核衣壳(N)蛋白的诱导以及表达第33页
     ·核衣壳(N)蛋白的纯化第33页
     ·纯化后 N 蛋白的 Western blot第33-34页
   ·小结第34-35页
3 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 N 蛋白间接 ELISA 的建立以及条件优化第35-44页
   ·材料与方法第35-39页
     ·材料第35-36页
     ·方法第36-39页
   ·结果第39-43页
     ·血清最佳稀释倍数与 N 蛋白抗原包被最佳浓度第39页
     ·N 蛋白抗原包被最佳条件第39页
     ·封闭液选择种类及合适浓度第39-40页
     ·最适封闭时间第40页
     ·兔抗猪 IgG 最适工作浓度第40页
     ·兔抗猪 IgG 孵育时间的确定第40-41页
     ·ELISA 临界值的确定第41-42页
     ·特异性检测结果第42页
     ·敏感性测定结果第42页
     ·批内的检测实验第42页
     ·批间的检测实验第42-43页
     ·保质期实验第43页
   ·小结第43-44页
4 抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 N 蛋白单克隆抗体的制备第44-53页
   ·材料与方法第44-49页
     ·材料第44-45页
     ·方法第45-49页
   ·结果第49-52页
     ·小鼠免疫之后的血清效价第49-50页
     ·细胞融合以及亚克隆结果第50页
     ·单克隆抗体的纯化和浓度第50-51页
     ·细胞上清、纯化前抗体和纯化后抗体效价测定第51页
     ·单克隆抗体亚型的鉴定第51-52页
     ·单克隆抗体的特异性第52页
   ·小结第52-53页
5 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金试纸条的制备第53-60页
   ·材料与方法第53-56页
     ·材料第53-54页
     ·方法第54-56页
   ·结果第56-59页
     ·胶体金的质量检测第56页
     ·McAb(4G3A1)最适 pH 的确定第56-57页
     ·McAb(4G3A1)最适标记量的确定第57页
     ·金标抗体 4G3A1 的制备流程第57页
     ·金标 McAb(4G3A1)最适稀释倍数的确定第57-58页
     ·NC 膜抗体最适包被量的确定第58页
     ·特异性检测第58-59页
     ·敏感性试验第59页
     ·保存期试验第59页
   ·小结第59-60页
讨论第60-62页
结论第62-63页
参考文献第63-70页
后记第70-71页
攻读学位期间取得的科研成果清单第71页

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