| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| ·甘露糖简介 | 第17-19页 |
| ·甘露糖的结构和性质 | 第17页 |
| ·甘露糖的应用 | 第17-18页 |
| ·甘露糖的生产方法 | 第18-19页 |
| ·化学法 | 第18页 |
| ·酶法 | 第18-19页 |
| ·D-甘露糖异构酶(D-Mannose Isomerase)简介 | 第19-23页 |
| ·D-甘露糖异构酶的来源和性质 | 第19页 |
| ·D-甘露糖异构酶的空间结构 | 第19-20页 |
| ·D-甘露糖异构酶的催化机理 | 第20-21页 |
| ·D-甘露糖异构酶的底物特异性 | 第21-22页 |
| ·D-甘露糖异构酶的催化影响因素 | 第22-23页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的表达系统 | 第23-27页 |
| ·大肠杆菌表达外源基因简介 | 第23页 |
| ·外源基因的表达方式 | 第23-24页 |
| ·诱导型表达 | 第24-26页 |
| ·包涵体 | 第26页 |
| ·包涵体的特点 | 第26页 |
| ·包涵体的形成 | 第26页 |
| ·提高大肠杆菌可溶性表达的方法 | 第26-27页 |
| ·选择合适的质粒与宿主菌 | 第26页 |
| ·选择合适的培养基成分 | 第26-27页 |
| ·与分子伴侣或融合蛋白共表达 | 第27页 |
| ·定点突变 | 第27-29页 |
| ·寡核苷酸定向突变 | 第28页 |
| ·盒式突变 | 第28页 |
| ·重叠延伸PCR | 第28页 |
| ·质粒扩增突变 | 第28-29页 |
| ·果糖-甘露糖体系的检测方法 | 第29-34页 |
| ·间苯二酚-盐酸法 | 第29-30页 |
| ·氯化钠-硼酸法 | 第30-31页 |
| ·半胱氨酸-咔唑法 | 第31页 |
| ·高效毛细管电泳法 | 第31-32页 |
| ·高效液相色谱法 | 第32-34页 |
| ·本论文研究的目的和内容 | 第34-35页 |
| ·本论文的研究目的 | 第34页 |
| ·本论文的研究内容 | 第34-35页 |
| 第二章 Emi诱导型表达质粒和组成型表达质粒的构建 | 第35-45页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·质粒与菌株 | 第35页 |
| ·仪器与试剂 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·PCR引物 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-37页 |
| ·菌株的培养及诱导表达 | 第36-37页 |
| ·细胞破碎方法 | 第37页 |
| ·其他实验方法 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-44页 |
| ·目的基因的获得 | 第37-39页 |
| ·pUC19-emi克隆质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·pET30-emi诱导表达质粒的构建及表达 | 第40-41页 |
| ·诱导型表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·BL21(DE3)/pET30-emi诱导表达的SDS-PAGE检测 | 第41页 |
| ·emi组成型表达质粒的构建及表达 | 第41-44页 |
| ·组成型表达质粒的构建 | 第42-44页 |
| ·JM105/pGEMK-HP-emi的SDS-PAGE检测 | 第44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 Fmi诱导型表达质粒和组成型表达质粒的构建 | 第45-62页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·质粒与菌株 | 第45-46页 |
| ·仪器与试剂 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·引物设计 | 第46-48页 |
| ·实验结果 | 第48-61页 |
| ·Assembly PCR扩增目的基因 | 第48-50页 |
| ·pUC19-fmi克隆质粒的构建 | 第50-52页 |
| ·定点突变修复错误碱基 | 第52-55页 |
| ·突变检测 | 第55-56页 |
| ·fmi组成型表达质粒的构建及SDS-PAGE检测 | 第56-59页 |
| ·组成型表达质粒的构建 | 第56-59页 |
| ·JM105/pGEMK-HP-fmi的SDS-PAGE检测 | 第59页 |
| ·pET30-fmi诱导型表达质粒的构建 | 第59-61页 |
| ·诱导型表达质粒的构建 | 第59-60页 |
| ·BL21(DE3)/pET30-fmi诱导表达的SDS-PAGE结果 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 D-甘露糖异构酶酶学性质的研究 | 第62-68页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·间苯二酚-盐酸法 | 第62-63页 |
| ·试剂 | 第62页 |
| ·D-甘露糖异构酶活性快速定性测定 | 第62页 |
| ·Emi和Fmi酶活快速检测结果 | 第62-63页 |
| ·高压液相色谱法 | 第63-67页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·仪器与设备 | 第63页 |
| ·标准曲线 | 第63-64页 |
| ·D-甘露糖异构酶催化性质研究 | 第64-67页 |
| ·培养时间的影响 | 第64-65页 |
| ·pH和温度对平衡转化率的影响 | 第65-66页 |
| ·催化时间对转化率的影响 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录 | 第73-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第83-84页 |
| 作者和指导老师简介 | 第84-85页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第85-86页 |
