| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·悬铃木研究现状 | 第15-16页 |
| ·植物成花分子机制 | 第16-25页 |
| ·成花诱导 | 第16-19页 |
| ·光周期途径 | 第17-18页 |
| ·春化途径 | 第18页 |
| ·自主途径 | 第18页 |
| ·赤霉素途径 | 第18-19页 |
| ·花的发端 | 第19-21页 |
| ·花序分生组织特性基因 | 第19页 |
| ·花分生组织特性基因 | 第19-21页 |
| ·花器官发育 | 第21-25页 |
| ·花发育模型介绍 | 第21-23页 |
| ·植物MADS-box基因 | 第23-25页 |
| ·A类基因 | 第23-24页 |
| ·B类基因 | 第24页 |
| ·C/D类基因 | 第24-25页 |
| ·E类基因 | 第25页 |
| ·RNA干涉作用机理及应用 | 第25-26页 |
| ·研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 转基因烟草T1代表型观测及基因表达分析 | 第27-52页 |
| 1 实验材料及试剂 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第27页 |
| ·实验试剂配制 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-32页 |
| ·T0代转基因烟草种子筛选方法的确定 | 第28-29页 |
| ·昔那霉素浓度梯度筛选(培养基法) | 第28页 |
| ·卡那霉素浓度梯度筛选(滤纸法) | 第28-29页 |
| ·卡那霉素穴盘筛选 | 第29页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第29-30页 |
| ·CTAB法提取植物基因组DNA | 第29页 |
| ·PCR检测 | 第29-30页 |
| ·转基因烟草的形态学观测 | 第30-31页 |
| ·超量表达载体转基因烟草基因表达强度的RT-PCR检测 | 第31-32页 |
| ·Trizol试剂盒提取RNA | 第31页 |
| ·RNA电泳检测 | 第31-32页 |
| ·RNA样品去除DNA | 第32页 |
| ·合成cDNA第一链 | 第32页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-49页 |
| ·转基因植株抗性筛选 | 第32-36页 |
| ·卡那霉素培养基法筛选 | 第32-34页 |
| ·卡那霉素穴盘筛选 | 第34页 |
| ·卡那霉素滤纸法筛选 | 第34-36页 |
| ·转基因烟草T1代表型观测及基因表达分析 | 第36-49页 |
| ·35S::PlacSEP1转基因烟草T1代植株的PCR检测 | 第36页 |
| ·35S::PlacSEP1转基因烟草T1代植株形态学观测 | 第36-38页 |
| ·35S::PlacSEP1转基因烟草T1代阳性植株表达强度的RT-PCR检测 | 第38-39页 |
| ·35S::antiPlacSEP1转基因烟草PCR检测及形态学观测 | 第39-40页 |
| ·35S::PlacSEP3转基因烟草T1代植株的PCR检测 | 第40-41页 |
| ·35S::PlacSEP3转基因烟草T1代植株形态学观测 | 第41-42页 |
| ·35S::PlacSEP3转基因烟草T1代阳性植株表达强度的RT-PCR检测 | 第42页 |
| ·35S::antiPlacSEP3转基因烟草PCR检测及形态学观测 | 第42-43页 |
| ·35S::PlacFUL转基因烟草T1代植株的PCR检测 | 第43-44页 |
| ·35S::PlacFUL转基因烟草T1代植株形态学观测 | 第44-45页 |
| ·35S::PlacFUL转基因烟草T1代阳性植株表达强度的RT-PCR检测 | 第45页 |
| ·35S::antiPlacFUL转基因烟草PCR检测及形态学观测 | 第45-46页 |
| ·35S::antiPlacSEP1×35S::antiPlacSEP3 T1代烟草形态学观测 | 第46-48页 |
| ·35S::antiPlacSEP3×35S::antiPlacSEP1 T1代烟草形态学观测 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·SEP1、SEP3同源基因在二球悬铃木中的功能探讨 | 第49-51页 |
| ·FUL同源基因在二球悬铃木中的功能探讨 | 第51-52页 |
| 第三章 悬铃木AP3、PI双基因转化烟草的表型分析 | 第52-60页 |
| 1. 实验材料 | 第52页 |
| ·菌株,植物材料 | 第52页 |
| ·实验试剂配制 | 第52页 |
| 2 实验方法 | 第52-54页 |
| ·T1代转35S::PlacAP3基因烟草筛选 | 第52页 |
| ·T1代转35S::PlacAP3基因植株的鉴定 | 第52-53页 |
| ·T1代转35S::PlacAP3基因植株基因表达强度的RT-PCR检测 | 第53页 |
| ·T1代转35S::PlacAP3基因烟草增殖培养 | 第53页 |
| ·烟草转化所用培养基 | 第53页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第54页 |
| ·转基因烟草的形态学观测 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-58页 |
| ·T1代转35S::PlacAP3基因植株获得 | 第54-56页 |
| ·卡那霉素培养基筛选 | 第54页 |
| ·35S::PlacAP3转基因烟草T1代植株的PCR检测 | 第54-55页 |
| ·35S::PlacAP3转基因烟草T1代阳性植株表达强度的RT-PCR检测 | 第55页 |
| ·T1代转35S::PlacAP3基因烟草增殖培养 | 第55-56页 |
| ·35S::PlacAP3-PI转基因植株获得 | 第56页 |
| ·35S::PlacAP3-PI转基因植株PCR检测 | 第56-57页 |
| ·35S::PlacAP3-PI转基因植株形态学观测 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 悬铃木LFY、FUL基因干涉载体构建及功能分析 | 第60-83页 |
| 1. 实验材料 | 第60-62页 |
| ·质粒、菌株 | 第60页 |
| ·酶、生化试剂 | 第60页 |
| ·常用实验试剂配制 | 第60-62页 |
| ·质粒提取试剂 | 第60-61页 |
| ·其它试剂 | 第61-62页 |
| 2. 实验方法 | 第62-70页 |
| ·干涉载体构建策略 | 第62-66页 |
| ·PlacLFY、PlacFUL干涉载体构建 | 第62-64页 |
| ·PlacLFY-FUL干涉载体构建 | 第64-66页 |
| ·目的基因获得 | 第66-67页 |
| ·目的片段回收 | 第66页 |
| ·目的片段与T载连接 | 第66-67页 |
| ·线性载体制备 | 第67-68页 |
| ·摇菌 | 第67页 |
| ·质粒DNA提取(碱裂解法) | 第67页 |
| ·目的基因、表达载体双酶切 | 第67-68页 |
| ·目的基因与表达载体连接 | 第68页 |
| ·连接产物热击法转化大肠杆菌感受态细胞 | 第68页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第68-69页 |
| ·重组质粒PCR筛选 | 第68页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第68-69页 |
| ·植物表达载体导入根癌农杆菌EHA105及其鉴定 | 第69页 |
| ·农杆菌电转感受态的制备 | 第69页 |
| ·重组质粒电击转化农杆菌 | 第69页 |
| ·转化菌的鉴定 | 第69页 |
| ·保菌 | 第69-70页 |
| ·农杆菌介导转化烟草分析基因的异源表达 | 第70页 |
| ·菌株和植物材料 | 第70页 |
| ·烟草转化所用培养基 | 第70页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第70页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第70页 |
| ·转基因烟草的形态学观测 | 第70页 |
| ·干涉表达载体转基因烟草基因表达强度的RT-PCR检测 | 第70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-81页 |
| ·干涉表达载体构建 | 第70-74页 |
| ·转基因烟草植株PCR检测 | 第74-75页 |
| ·转基因烟草植株形态学观测 | 第75-79页 |
| ·35S::PlacLFYi转基因烟草植株形态学观测 | 第75-76页 |
| ·35S::PlacFULi转基因烟草植株形态学观测 | 第76-77页 |
| ·35S::PlacLFY-FULi转基因烟草植株形态学观测 | 第77-79页 |
| ·悬铃木基因干涉对烟草内源基因的影响 | 第79-81页 |
| ·35S::PlacLFYi的转入对烟草内源基因的影响 | 第79页 |
| ·35S::PlacFULi的转入对烟草内源基因的影响 | 第79-80页 |
| ·35S::PlacLFY-FULi的转入对烟草内源基因的影响 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-83页 |
| ·LFY同源基因在二球悬铃木中的功能探讨 | 第81-82页 |
| ·FUL同源基因在二球悬铃木中的功能探讨 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
