| 缩略语表 | 第1-10页 |
| 第一部分 Oct4对肿瘤干细胞成瘤能力和多向分化潜能的影响 | 第10-63页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-19页 |
| 材料与方法 | 第19-36页 |
| 一、主要实验试剂 | 第19-21页 |
| 二、主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 三、主要实验方法 | 第22-35页 |
| (一) 慢病毒载体构建包装及转导 | 第22-25页 |
| 1. 慢病毒载体构建 | 第22-23页 |
| 2. 质粒的转化和提取 | 第23-24页 |
| 3. 慢病毒颗粒的包装 | 第24-25页 |
| 4. 慢病毒转导 | 第25页 |
| (二) 肿瘤干细胞T3A-A3细胞的来源 | 第25-26页 |
| (三) 基因及蛋白表达检测 | 第26-30页 |
| 1. RT-PCR检测基因表达 | 第26-29页 |
| 2. Western blotting检测蛋白表达 | 第29-30页 |
| (四) 细胞增殖能力检测 | 第30-32页 |
| 1. 平板克隆形成实验 | 第30-31页 |
| 2. MTT测定细胞生长曲线 | 第31页 |
| 3. 流式细胞术检测细胞周期 | 第31页 |
| 4. β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老 | 第31-32页 |
| 5. p16免疫荧光染色 | 第32页 |
| (五) 肿瘤干细胞肿瘤球形成能力检测 | 第32-33页 |
| 1. 肿瘤干细胞成球数目检测 | 第32页 |
| 2. 肿瘤干细胞成球大小检测 | 第32-33页 |
| (六) Oct4对T3A-A3肿瘤发生发展影响的检测 | 第33-34页 |
| 1. Oct4对T3A-A3细胞成瘤能力的影响 | 第33页 |
| 2. Oct4对肿瘤生长速度的影响 | 第33页 |
| 3. 肿瘤组织中Oct4和PCNA免疫组化染色 | 第33-34页 |
| (七) Oct4对肿瘤干细胞多向分化潜能影响的检测 | 第34-35页 |
| 1. 肿瘤组织条件培养基的制备 | 第34页 |
| 2. T3A-A3细胞中Oct4的敲降 | 第34页 |
| 3. 肿瘤干细胞的分化诱导 | 第34-35页 |
| 4. 肿瘤干细胞定向分化标志的检测 | 第35页 |
| 四、统计学分析 | 第35-36页 |
| 结果 | 第36-55页 |
| 一、Oct4在肿瘤干细胞和不同肝癌细胞株中表达的比较 | 第36-37页 |
| 二、Oct4基因敲降和异位表达细胞株的建立 | 第37-40页 |
| 1. 肿瘤干细胞Oct4基因敲降株的建立 | 第37-39页 |
| 2. HepG2细胞Oct4基因异位表达株的建立 | 第39-40页 |
| 三、Oct4对T3A-A3细胞增殖的影响 | 第40-43页 |
| 1. Oct4对T3A-A3细胞平板克隆形成能力的影响 | 第40-41页 |
| 2. Oct4对T3A-A3细胞周期的影响 | 第41-42页 |
| 3. Oct4对T3A-A3细胞衰老的影响 | 第42-43页 |
| 四、Oct4对T3A-A3细胞肿瘤球形成能力的影响 | 第43-45页 |
| 1. Oct4对T3A-A3细胞形成肿瘤球数目的影响 | 第43-44页 |
| 2. Oct4对T3A-A3细胞形成肿瘤球大小的影响 | 第44-45页 |
| 3. 不同培养条件对T3A-A3细胞中Oct4表达水平的影响 | 第45页 |
| 五、Oct4对T3A-A3细胞肿瘤发生发展的影响 | 第45-48页 |
| 1. Oct4对T3A-A3细胞肿瘤发生的影响 | 第45-46页 |
| 2. Oct4对T3A-A3细胞肿瘤生长的影响 | 第46-47页 |
| 3. Oct4对T3A-A3肿瘤增殖细胞核抗原表达的影响 | 第47-48页 |
| 六、Oct4对HepG2细胞及肿瘤生长的影响 | 第48-51页 |
| 1. pWPTS-Oct4对HepG2细胞生长的影响 | 第48-49页 |
| 2. Oct4对HepG2细胞肿瘤生长的影响 | 第49-50页 |
| 3. Oct4对HepG2肿瘤增殖细胞核抗原表达的影响 | 第50-51页 |
| 七、Oct4对T3A-A3细胞多向分化潜能的影响 | 第51-55页 |
| 1. Oct4对T3A-A3细胞向黑色素瘤细胞方向分化的影响 | 第51-53页 |
| 2. Oct4对T3A-A3细胞向淋巴瘤细胞方向分化的影响 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 第二部分 miR-145对肿瘤干细胞成瘤能力的影响 | 第63-95页 |
| 中文摘要 | 第63-65页 |
| 英文摘要 | 第65-67页 |
| 前言 | 第67-70页 |
| 材料与方法 | 第70-79页 |
| 一、主要实验方法 | 第70-78页 |
| (一) miR-145慢病毒颗粒包装及转导 | 第70-72页 |
| 1. miR-145慢病毒载体测序 | 第70-71页 |
| 2. 慢病毒颗粒的包装 | 第71页 |
| 3. 慢病毒转导 | 第71-72页 |
| (二) miR-145表达检测 | 第72-74页 |
| 1. 细胞总RNA提取 | 第72页 |
| 2. 合成cDNA | 第72-73页 |
| 3. 实时定量PCR扩增miRNA | 第73-74页 |
| (三) 细胞增殖能力检测 | 第74-76页 |
| 1. 平板克隆形成实验 | 第74页 |
| 2. MTT法测定细胞增殖倍数 | 第74-75页 |
| 3. 流式细胞术测定细胞周期 | 第75页 |
| 4. 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色 | 第75页 |
| 5. p16免疫荧光染色 | 第75-76页 |
| (四) 肿瘤干细胞肿瘤球形成能力检测 | 第76页 |
| 1. 肿瘤干细胞成球数目检测 | 第76页 |
| 2. 肿瘤干细胞成球大小检测 | 第76页 |
| (五) 裸鼠皮下移植瘤实验 | 第76-78页 |
| 1. 成瘤能力实验 | 第76-77页 |
| 2. 肿瘤生长速度检测 | 第77页 |
| 3. 肿瘤组织免疫组化染色 | 第77-78页 |
| 二、统计学分析 | 第78-79页 |
| 结果 | 第79-90页 |
| 一、miR-145在肿瘤干细胞和肝癌细胞中的表达 | 第79页 |
| 二、miR-145对T3A-A3细胞增殖的影响 | 第79-82页 |
| 1. miR-145对T3A-A3细胞平板克隆形成能力的影响 | 第79-80页 |
| 2. miR-145对T3A-A3细胞周期的影响 | 第80-81页 |
| 3. miR-145对T3A-A3细胞衰老的影响 | 第81-82页 |
| 三、miR-145对T3A-A3细胞形成肿瘤球的影响 | 第82-85页 |
| 1. miR-145对T3A-A3细胞成球数目的影响 | 第82-83页 |
| 2. miR-145对T3A-A3细胞成球大小的影响 | 第83-84页 |
| 3. 不同培养条件对T3A-A3中miR-145表达水平的影响 | 第84-85页 |
| 四、miR-145对T3A-A3肿瘤发生发展的影响 | 第85-87页 |
| 1. miR-145对T3A-A3肿瘤发生的影响 | 第85-86页 |
| 2. miR-145对T3A-A3肿瘤生长的影响 | 第86-87页 |
| 五、miR-145调控T3A-A3增殖及成瘤能力的机制分析 | 第87-90页 |
| 1. T3A-A3细胞转导miR-145后Oct4表达的变化 | 第87-88页 |
| 2. Oct4对miR-145转导的T3A-A3细胞增殖的影响 | 第88页 |
| 3. Oct4对miR-145转导的T3A-A3肿瘤生长的影响 | 第88-90页 |
| 讨论 | 第90-94页 |
| 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 文献综述 | 第102-109页 |
| 参考文献 | 第106-109页 |
| 个人简历 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
