| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-40页 |
| 一、一氧化氮供体最新研究进展及应用前景 | 第21-30页 |
| 1 一氧化氮供体药物在各种疾病治疗中的应用 | 第21-23页 |
| 2 NO供体研究的最新进展和趋势 | 第23-29页 |
| 3 结语与展望 | 第29-30页 |
| 二、细菌耐药性的生化机制及其对策 | 第30-35页 |
| 1 抗生素耐药性的生化机制 | 第30-32页 |
| 2 克服抗生素耐药性的方法 | 第32-34页 |
| 3 结语 | 第34-35页 |
| 三、一氧化氮与细胞凋亡的关系及研究进展 | 第35-40页 |
| 1 NO对细胞凋亡的双重作用机制 | 第35-36页 |
| 2 NO与细胞凋亡关系的研究进展 | 第36-39页 |
| 3 结语 | 第39-40页 |
| 第二章 β-半乳糖苷酶依赖的新型一氧化氮杀菌剂β-Gal-NONOate的抗菌作用研究 | 第40-56页 |
| 一、材料 | 第41-44页 |
| ·菌种和培养基 | 第41-42页 |
| ·试剂 | 第42-44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| 二、方法 | 第44-49页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第44-45页 |
| ·转化子的鉴定 | 第45-47页 |
| ·集落形成单位的测定 | 第47页 |
| ·测定细菌的生长及β-半乳糖苷酶酶活曲线 | 第47页 |
| ·NO供体对细菌存活率影响的测定 | 第47-48页 |
| ·测量胞内的NO水平 | 第48-49页 |
| ·统计分析 | 第49页 |
| 三、结果 | 第49-53页 |
| ·E.coli DH5α(pUC18)菌株的构建 | 第49-50页 |
| ·分析细菌的生长曲线和酶活性曲线 | 第50-51页 |
| ·NO供体对细菌存活率的影响 | 第51-52页 |
| ·胞内的NO水平分析 | 第52-53页 |
| 四、讨论 | 第53-55页 |
| 五、结语与展望 | 第55页 |
| 六、创新点 | 第55-56页 |
| 第三章 β-Gal-NONOate消除大肠杆菌Amp耐药性作用的探索 | 第56-69页 |
| 一、材料 | 第56-58页 |
| ·菌种和培养基 | 第56-57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·仪器 | 第57-58页 |
| 二、方法 | 第58-61页 |
| ·X-gal染色鉴定β-半乳糖苷酶的活性 | 第58页 |
| ·最低抑菌浓度(MIC)的测定 | 第58页 |
| ·Amp抗性菌株的诱导 | 第58-59页 |
| ·NO供体对E.coli K-12 Amp耐药性的影响 | 第59-60页 |
| ·抗生素存在的条件下,NO供体对抗性细菌生存能力的影响 | 第60-61页 |
| ·测定细菌的生长曲线 | 第61页 |
| 三、结果 | 第61-65页 |
| ·Amp抗性菌株的获得 | 第61-62页 |
| ·NO供体对消除E.coil K-12 Amp抗性的影响 | 第62-64页 |
| ·抗生素存在的情况下NO供体对恢复细菌敏感性的影响 | 第64页 |
| ·细菌生长曲线分析 | 第64-65页 |
| 四、讨论 | 第65-67页 |
| 五、展望和前景 | 第67-69页 |
| 第四章 双向电泳技术比较抗性消除前后细菌蛋白质组的变化 | 第69-86页 |
| 一、材料 | 第72-74页 |
| ·菌种和培养基 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72-74页 |
| ·仪器 | 第74页 |
| 二、方法 | 第74-78页 |
| ·菌种活化 | 第74-75页 |
| ·蛋白提取 | 第75页 |
| ·蛋白检测(Bradford法) | 第75页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测样品蛋白 | 第75-76页 |
| ·第一向等电聚焦电泳(IFE) | 第76-77页 |
| ·第二向SDS-PAGE电泳 | 第77-78页 |
| 三、结果 | 第78-83页 |
| ·标准蛋白曲线 | 第78-79页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测样品蛋白 | 第79页 |
| ·双向电泳图像分析 | 第79-83页 |
| 四、讨论 | 第83-84页 |
| 五、结语与展望 | 第84-86页 |
| 第五章 一氧化氮供体抗肿瘤作用新途径的建立—定位肿瘤细胞内释放NO | 第86-98页 |
| 一、材料 | 第88-90页 |
| ·细胞培养 | 第88-89页 |
| ·试剂 | 第89页 |
| ·仪器 | 第89-90页 |
| 二、方法 | 第90-92页 |
| ·细胞培养 | 第90页 |
| ·X-gal染色鉴定β-半乳糖苷酶的活性 | 第90页 |
| ·细胞内NO~(2-)/NO~(3-)浓度的测定(作为一种衡量NO水平的方法) | 第90-91页 |
| ·细胞死亡率(cell death rate)分析 | 第91页 |
| ·细胞毒性(cytotoxicity)分析 | 第91页 |
| ·统计分析 | 第91-92页 |
| 三、结果 | 第92-94页 |
| ·X-gal染色鉴定β-半乳糖苷酶的活性 | 第92页 |
| ·胞内的NO水平分析 | 第92-93页 |
| ·β-Gal-NONOate和NONOate对细胞死亡率的影响 | 第93页 |
| ·经β-Gal-NONOate和NONOate处理的两种细胞存活率的比较 | 第93-94页 |
| 四、讨论 | 第94-96页 |
| 五、结语与展望 | 第96页 |
| 六、创新点 | 第96-98页 |
| 第六章 新型NO供体β-Gal-NONOate对C6及HeLa细胞的抗肿瘤作用 | 第98-112页 |
| 一、材料 | 第98-102页 |
| ·细胞培养 | 第98-99页 |
| ·试剂 | 第99-101页 |
| ·仪器 | 第101-102页 |
| 二、方法 | 第102-106页 |
| ·细胞培养 | 第102页 |
| ·重组pcDNA3-LacZ质粒的制备 | 第102-104页 |
| ·质粒转染与稳定表达β-半乳糖苷酶的阳性细胞克隆的筛选 | 第104页 |
| ·X-gal染色检测β-半乳糖苷酶活性 | 第104页 |
| ·细胞中NO释放量的检测 | 第104-105页 |
| ·细胞克隆形成能力的检测 | 第105页 |
| ·细胞死亡率检测 | 第105页 |
| ·细胞毒性检测—MTT法 | 第105-106页 |
| ·统计分析 | 第106页 |
| 三、结果 | 第106-110页 |
| ·pcDNA3-LacZ质粒的验证 | 第106页 |
| ·阳性细胞克隆的筛选 | 第106页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的检测 | 第106-107页 |
| ·细胞计数法比较NO供体对C6细胞死亡率的影响 | 第107页 |
| ·两种NO供体在C6/LacZ、C6细胞胞内的NO释放量 | 第107-108页 |
| ·两种NO供体在HeLa/LacZ、HeLa细胞胞内的NO释放量 | 第108页 |
| ·HeLa/LacZ、HeLa细胞克隆形成率和细胞死亡率检测 | 第108-109页 |
| ·MTT法比较β-Gal-NONOate和NONOate的抗肿瘤活性 | 第109-110页 |
| 四、讨论 | 第110-111页 |
| 五、展望 | 第111-112页 |
| 第七章 β-Gal-NONOate诱导细胞凋亡作用的研究 | 第112-134页 |
| 一、材料 | 第113-115页 |
| ·细胞培养 | 第113页 |
| ·试剂 | 第113-115页 |
| ·仪器 | 第115页 |
| 二、方法 | 第115-119页 |
| ·细胞培养 | 第115页 |
| ·细胞形态学观察 | 第115-116页 |
| ·细胞凋亡的DNA电泳观察 | 第116页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡 | 第116-117页 |
| ·检测细胞内[Ca~(2+)]_i的变化 | 第117页 |
| ·检测细胞线粒体跨膜电位的变化 | 第117-118页 |
| ·双染法检测凋亡细胞比例 | 第118-119页 |
| ·β-Gal-NONOate与cisplatin联合用药对肿瘤细胞的细胞毒作用 | 第119页 |
| ·统计学分析 | 第119页 |
| 三、结果与分析 | 第119-129页 |
| ·细胞形态学观察 | 第119-124页 |
| ·细胞凋亡的DNA电泳观察 | 第124-125页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡 | 第125页 |
| ·细胞内[Ca~(2+)]_i的变化 | 第125-126页 |
| ·细胞线粒体跨膜电位的变化 | 第126页 |
| ·双染法检测凋亡细胞比例 | 第126-127页 |
| ·β-Gal-NONOate与cisplatin联合用药对肿瘤细胞的细胞毒作用 | 第127-129页 |
| 四、讨论 | 第129-132页 |
| 五、意义 | 第132-134页 |
| 参考文献 | 第134-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
| ACKNOWLEDGMENTS | 第154-155页 |
| 在读期间发表文章及获奖情况 | 第155-158页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第158-159页 |
| 附:两篇已发表的英文SCI论文 | 第159-168页 |
