| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-22页 |
| 目录 | 第22-25页 |
| 缩写词简表 | 第25-27页 |
| 实验技术路线 | 第27-28页 |
| 第一部分 染色体3p21鼻咽癌易感基因区LTF基因的筛查 | 第28-90页 |
| 第一章 前言 | 第28-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-49页 |
| 1 材料 | 第31-36页 |
| ·组织细胞样本 | 第31-33页 |
| ·引物 | 第33-34页 |
| ·cDNA微阵列制备 | 第34页 |
| ·主要试剂盒 | 第34-35页 |
| ·寡核苷酸探针标记试剂盒和原位杂交检测试剂 | 第35页 |
| ·用于组织微阵列原位杂交的寡核苷酸裸探针 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·分析软件 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-49页 |
| ·基于鼻咽癌抑制消减杂交文库的cDNA mciroarray的制备 | 第36-40页 |
| ·组织标本的显微切割,RNA的抽提及线性扩增 | 第40-41页 |
| ·芯片杂交 | 第41-44页 |
| ·芯片结果分析以及差异表达克隆测序 | 第44-45页 |
| ·差异表达基因的Real-time quantitative RT-PCR验证 | 第45页 |
| ·原位杂交 | 第45-48页 |
| ·结果观察和检测结果数据库的建立 | 第48-49页 |
| 第三章 结果 | 第49-85页 |
| 1 抑制消减杂交文库cDNA克隆的PCR扩增 | 第49页 |
| 2 19例鼻咽癌组织和10例正常鼻咽上皮组织样本的显微切割 | 第49-50页 |
| 3 总RNA的抽提和aRNA的线性扩增 | 第50-51页 |
| 4 芯片质检 | 第51页 |
| 5 自身比较 | 第51页 |
| 6 片间比较可重复率 | 第51-52页 |
| 7 片内比较可重复率 | 第52页 |
| 8 鼻咽癌差异表达基因的筛选 | 第52-56页 |
| 9 105个差异表达克隆的序列测定结果 | 第56-57页 |
| 10 105个克隆的同源性比对结果 | 第57-72页 |
| 11 Real-time quantitative PCR验证差异表达基因的表达 | 第72-80页 |
| 12 原位杂交检测差异表达基因LTF、PLUNC和STAT5A在鼻咽癌和鼻咽慢性炎症中的表达 | 第80-85页 |
| 第四章 讨论 | 第85-90页 |
| 1 鼻咽癌组织的显微切割及其RNA线性扩增 | 第85-86页 |
| 2 基于抑制消减杂交文库的cDNA芯片技术是鉴定鼻咽癌差异表达基因以及筛查肿瘤分子标记物的有用方法 | 第86-88页 |
| 3 Real-time quantitative RT-PCR和原位杂交技术为验证肿瘤差异表达基因的有效方法 | 第88-89页 |
| 4 两种不同基因芯片结果均显示染色体3p21鼻咽癌易感基区LTF基因在鼻咽癌组织中表达明显下调 | 第89-90页 |
| 第二部分 LTF基因抑制鼻咽癌细胞增殖的功能研究 | 第90-113页 |
| 第一章 前言 | 第90-92页 |
| 第二章 材料与方法 | 第92-95页 |
| 第一节 材料 | 第92-93页 |
| ·鼻咽癌细胞系 | 第92页 |
| ·重组人乳铁传递蛋白 | 第92页 |
| ·细胞培养用试剂 | 第92页 |
| ·抗体 | 第92页 |
| ·蛋白质分子量标准 | 第92页 |
| ·其他试剂 | 第92-93页 |
| ·常用仪器 | 第93页 |
| 第二节 方法 | 第93-95页 |
| ·重组人乳铁传递蛋白(rhlf)干预浓度及干预时间 | 第93页 |
| ·培养细胞的蛋白质制备 | 第93页 |
| ·MTT试验 | 第93-94页 |
| ·细胞周期分析 | 第94页 |
| ·Western-blot分析 | 第94-95页 |
| 第三章 结果 | 第95-105页 |
| ·MTT试验结果 | 第95-97页 |
| ·流式细胞术分析LTF基因对鼻咽癌细胞株细胞周期的影响 | 第97-101页 |
| ·LTF基因抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖的机制研究 | 第101-105页 |
| ·LTF基因对周期蛋白cyclin D1,p-Rb表达水平的影响 | 第102页 |
| ·LTF基因对细胞周期素激酶抑制蛋白p21,p27表达水平的影响 | 第102-103页 |
| ·LTF对MAPK信号传导通路中信号分子表达水平的影响 | 第103-104页 |
| ·LTF基因对p53,total stat3,p-stat3(Tyr705)蛋白表达水平的影响 | 第104-105页 |
| 第四章 讨论 | 第105-112页 |
| 1 LTF基因在体外抑制鼻咽癌细胞的生长、增殖 | 第105-106页 |
| 2 LTF基因抑制鼻咽癌细胞增殖的可能作用机制 | 第106-112页 |
| 第五章 结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-121页 |
| 综述 | 第121-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 作者简介 | 第131-134页 |
