| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一部分 钩端螺旋体腺苷甲硫氨酸依赖型氧甲基化酶(LiOMT)的晶体学研究 | 第13-43页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| ·甲基化酶背景知识介绍 | 第14-17页 |
| ·甲基化酶概论 | 第14-15页 |
| ·基于底物对甲基化酶的分类 | 第15-17页 |
| ·以蛋白质为底物的甲基化酶 | 第15页 |
| ·以DNA为底物的甲基化酶 | 第15-16页 |
| ·以RNA为底物的甲基化酶 | 第16-17页 |
| ·以小分子为底物的甲基化酶 | 第17页 |
| ·以脂类为底物的甲基化酶 | 第17页 |
| ·LiOMT的研究背景 | 第17-23页 |
| ·LiOMT来源于问号型钩端螺旋体 | 第17-19页 |
| ·LiOMT属于以小分子为底物的甲基化酶家族 | 第19页 |
| ·Pfam PF01596家族中LiOMT的同源蛋白 | 第19-23页 |
| ·咖啡酰辅酶A氧甲基化酶 | 第19-21页 |
| ·儿茶酚氧甲基化酶 | 第21-23页 |
| ·细菌来源的抗生素合成相关氧甲基化酶 | 第23页 |
| ·本课题的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第25-26页 |
| ·基因克隆及表达载体构建 | 第25页 |
| ·蛋白表达 | 第25页 |
| ·蛋白纯化 | 第25-26页 |
| ·溶液中蛋白聚合状态检测 | 第26页 |
| ·结晶和数据收集 | 第26-27页 |
| ·晶体筛选 | 第26-27页 |
| ·数据收集 | 第27页 |
| ·结构测定 | 第27页 |
| ·蛋白底物相关实验 | 第27-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-39页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第29-30页 |
| ·溶液中蛋白聚合状态检测 | 第30-31页 |
| ·LiOMT的晶体结构 | 第31-34页 |
| ·与其他氧甲基化酶的比较 | 第34-36页 |
| ·LiOMT底物预测 | 第36-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 第二部分 人线粒体外膜蛋白mitoNEET的晶体学研究 | 第43-97页 |
| 第一章 绪论 | 第44-62页 |
| ·mitoNEET的研究背景 | 第44-52页 |
| ·糖尿病与治疗药物 | 第44-45页 |
| ·mitoNEET的发现 | 第45-47页 |
| ·引言 | 第45-46页 |
| ·mitoNEET与吡格列酮相互作用 | 第46-47页 |
| ·mitoNEET的功能研究进展 | 第47-52页 |
| ·mitoNEET拥有特殊的CDGSH-锌指结构域 | 第47-48页 |
| ·所谓的CDGSH-锌指蛋白结合的是铁元素 | 第48页 |
| ·mitoNEET的亚细胞定位 | 第48-49页 |
| ·mitoNEET的mRNA和蛋白是广泛表达的 | 第49页 |
| ·mitoNEET由一段N端信号序列引导定位至线粒体外膜上 | 第49-50页 |
| ·mitoNEET是一个朝向细胞质的整合外膜蛋白 | 第50-51页 |
| ·mitoNEET调节线粒体氧化容量 | 第51-52页 |
| ·已知含铁的蛋白在线粒体氧化磷酸化中的作用 | 第52-58页 |
| ·线粒体氧化磷酸化 | 第52-55页 |
| ·复合物Ⅰ | 第52-53页 |
| ·复合物Ⅱ | 第53页 |
| ·复合物Ⅲ | 第53-54页 |
| ·复合物Ⅳ | 第54-55页 |
| ·复合物Ⅴ | 第55页 |
| ·铁硫中心 | 第55-58页 |
| ·mitoNEET的研究意义 | 第58-62页 |
| 第二章 材料与方法 | 第62-75页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第62-68页 |
| ·基因克隆及表达载体构建 | 第62-65页 |
| ·LIC克隆 | 第62-63页 |
| ·pMCSG9载体 | 第63-64页 |
| ·pMCSG9-mitoNEET_(33-108)载体构建 | 第64-65页 |
| ·pET28b-mitoNEET_(27-108)载体构建 | 第65页 |
| ·蛋白表达 | 第65-66页 |
| ·mitoNEET_(27-108)的表达 | 第65页 |
| ·TEV蛋白酶的表达 | 第65页 |
| ·mitoNEET_(33-108)的表达 | 第65-66页 |
| ·蛋白纯化 | 第66-68页 |
| ·mitoNEE_(27-108)的纯化 | 第66页 |
| ·TEV蛋白酶的纯化 | 第66-67页 |
| ·mitoNEE_(33-108)的纯化 | 第67-68页 |
| ·紫外-可见光吸收光谱 | 第68页 |
| ·ICP-MS定量分析铁元素 | 第68-70页 |
| ·ICP-MS简介 | 第68-69页 |
| ·ICP-MS测量低PH下mitoNEET中铁元素的去向 | 第69-70页 |
| ·结晶和数据收集 | 第70-75页 |
| ·晶体筛选 | 第70页 |
| ·数据收集 | 第70-71页 |
| ·第一套数据:用于解决相位(I4_l22) | 第70-71页 |
| ·第二套数据:用于提高衍射分辨率(I4_l22) | 第71页 |
| ·第三套数据:另一种空间群P2_l2_l2_l | 第71页 |
| ·结构测定 | 第71-75页 |
| ·SAD法求解相位的原理 | 第71-73页 |
| ·mitoNEET结构测定 | 第73-75页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第75-90页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第75-79页 |
| ·mitoNEET_(27-108)的表达和纯化 | 第75-76页 |
| ·mitoNEET_(33-108)的表达和纯化 | 第76-79页 |
| ·紫外-可见光光谱 | 第79-80页 |
| ·ICP-MS测量低PH下mitoNEET中铁元素的去向 | 第80-81页 |
| ·mitoNEET的晶体结构 | 第81-90页 |
| ·mitoNEET_(33-108)整体结构 | 第81-84页 |
| ·[2Fe-2S]铁硫中心和铁硫中心结合结构域 | 第84-85页 |
| ·mitoNEET的二体结构 | 第85-89页 |
| ·mitoNEET上可能的吡格列酮结合位点 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-97页 |
| 第三部分 大肠杆菌膜蛋白二酯酰甘油激酶的初步晶体学研究 | 第97-114页 |
| 第一章 绪论 | 第98-108页 |
| ·二酯酰甘油激酶DAGK的背景知识介绍 | 第98-102页 |
| ·DAGK概述 | 第98-100页 |
| ·大肠杆菌DAGK | 第100-102页 |
| ·膜蛋白结晶概述 | 第102-106页 |
| ·本课题的研究意义 | 第106-108页 |
| 第二章 初步研究进展 | 第108-110页 |
| ·DAGK的表达和纯化 | 第108页 |
| ·DAGK的晶体筛选和优化 | 第108-109页 |
| ·DAGK的晶体衍射 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第116页 |
