| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 中文目录 | 第8-11页 |
| 英文目录 | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-37页 |
| ·肿瘤坏死因子-α | 第14-20页 |
| ·简介 | 第14-15页 |
| ·TNF-α诱导细胞死亡 | 第15-18页 |
| ·TNF-α诱导激活NF-κB | 第18-19页 |
| ·TNF-α诱导激活MAPK | 第19-20页 |
| ·受体相互作用蛋白家族 | 第20-34页 |
| ·简介 | 第20页 |
| ·Rip激酶家族成员结构特点 | 第20-21页 |
| ·Rip1 | 第21-26页 |
| ·Rip2 | 第26-28页 |
| ·Rip3 | 第28-32页 |
| ·Rip4 | 第32-33页 |
| ·Rip家族其它成员 | 第33-34页 |
| ·立题背景 | 第34-37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-48页 |
| ·实验药品和试剂 | 第37页 |
| ·细胞培养及稳定转染细胞株的筛选 | 第37-38页 |
| ·细胞培养液的配制 | 第37-38页 |
| ·细胞培养和传代 | 第38页 |
| ·细胞转染和稳定表达细胞株的筛选 | 第38页 |
| ·RNA的提取与RT-PCR | 第38-40页 |
| ·总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第39页 |
| ·小鼠cDNA表达谱芯片检测两株细胞各基因表达情况 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR检测特定基因表达情况 | 第40页 |
| ·逆转NIH3T3细胞Rip3的表达情况 | 第40-43页 |
| ·NIH3T3(R)细胞外源高水平稳定表达Rip3 | 第40-41页 |
| ·NIH3T3(S)细胞的RNA干扰实验 | 第41-43页 |
| ·利用流式细胞仪分析细胞存活率、ROS、细胞周期 | 第43-45页 |
| ·测定细胞存活率 | 第43-44页 |
| ·测定胞内ROS的积聚 | 第44页 |
| ·测定细胞周期 | 第44-45页 |
| ·蛋白质分析 | 第45-46页 |
| ·蛋白质的SDS-PAGE电泳与Western blot分析 | 第45页 |
| ·溶液配制 | 第45-46页 |
| ·细胞内乳酸和ATP水平测定 | 第46页 |
| ·DNA片段化分析 | 第46-47页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第47-48页 |
| 3 结果与讨论 | 第48-78页 |
| ·TNF-α通过不同信号通路诱导NIH3T3细胞死亡 | 第48-50页 |
| ·两株细胞死亡对caspase的不同依赖性 | 第48页 |
| ·抑制caspase足以增强TNF-α诱导的NIH3T3(S)细胞死亡 | 第48-50页 |
| ·Rip3在两株细胞中的表达差异 | 第50页 |
| ·Rip3是TNF-α诱导的caspase非依赖性死亡途径的必要成员 | 第50-53页 |
| ·下调Rip3的NIH3T3(S)细胞和过量表达Rip3的NIH3T3(R)细胞 | 第50-51页 |
| ·TNF-α诱导的caspase非依赖性死亡需要Rip3的高水平表达 | 第51-53页 |
| ·Rip3参与了TNF-α诱导的ROS积聚 | 第53-56页 |
| ·ROS在TNF-α诱导的caspase非依赖性细胞死亡中起了重要作用 | 第53-56页 |
| ·ROS的积聚需要Rip3 | 第56页 |
| ·糖酵解参与调节caspase非依赖性死亡 | 第56-68页 |
| ·糖酵解在caspase非依赖的细胞死亡中是必需的 | 第56页 |
| ·mTOR通路不参与调节caspase非依赖的细胞死亡 | 第56-58页 |
| ·细胞死亡需要的是一条有氧糖酵解途径的参与 | 第58-63页 |
| ·具有细胞毒性的ROS的生成需要有氧糖酵解途径的参与 | 第63-65页 |
| ·ATP水平下降和细胞死亡无关 | 第65-68页 |
| ·总结与讨论 | 第68-78页 |
| 附录一:图表索引 | 第78-80页 |
| 附录二:缩略语及中英文对照 | 第80-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
