| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-22页 |
| ·鸡球虫病的国内外研究现状 | 第9-10页 |
| ·球虫疫苗的研究现状 | 第10-12页 |
| ·鸡球虫免疫原性 | 第10页 |
| ·宿主免疫应答 | 第10-11页 |
| ·球虫疫苗的种类 | 第11-12页 |
| ·基因工程抗体的研究进展 | 第12-16页 |
| ·单链抗体的构建理论 | 第13-14页 |
| ·单链抗体的表达 | 第14-15页 |
| ·单链抗体的应用 | 第15-16页 |
| ·噬菌体抗体库的研究进展 | 第16-22页 |
| ·噬菌体抗体库技术发展概况 | 第16页 |
| ·噬菌体抗体库技术的基本原理 | 第16-19页 |
| ·噬菌体抗体库的优点 | 第19-20页 |
| ·噬菌体展示技术的应用 | 第20-22页 |
| 2 材料与仪器 | 第22-26页 |
| ·总RNA提取及反转录所需主要试剂 | 第22页 |
| ·全套V_L和V_H基因的扩增以及V_L和V_H拼接所需主要试剂 | 第22页 |
| ·ScFv鉴定所需主要试剂 | 第22页 |
| ·噬菌体抗体库建立所需主要试剂 | 第22-23页 |
| ·噬菌体抗体库筛选所需主要试剂 | 第23页 |
| ·提取裂殖子所需主要试剂 | 第23页 |
| ·ELISA检测所需主要试剂 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE电泳所需主要试剂 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·扩增轻链重链可变区抗体库所需引物 | 第24-25页 |
| ·VL和VH拼接所需引物 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 3 方法与程序 | 第26-38页 |
| ·BALB/C小鼠脾脏总RNA的提取和cDNA的合成 | 第26-27页 |
| ·BALB/C小鼠脾脏总RNA的提取 | 第26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| ·全套VH和VL基因的扩增 | 第27-29页 |
| ·以cDNA第一链为模板，分别进行全套VH和VL基因的扩增 | 第27页 |
| ·VH的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·VL的PCR扩增 | 第28页 |
| ·从琼脂糖胶中回收DNA片段 | 第28-29页 |
| ·ScFv基因的构建以及克隆鉴定 | 第29-33页 |
| ·ScFv基因的构建 | 第29-30页 |
| ·ScFv基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·ScFv基因重组子的鉴定 | 第31-33页 |
| ·ScFv噬菌体抗体库的构建 | 第33-34页 |
| ·全套ScFv基因和载体PCANTAB-5E的双酶切 | 第33页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第33-34页 |
| ·重组载体的转化 | 第34页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第34页 |
| ·噬菌体抗体库的建立 | 第34页 |
| ·噬菌体抗体库滴度测定 | 第34页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第34-36页 |
| ·裂殖子可溶性抗原的制备 | 第34-35页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选过程 | 第35页 |
| ·ELISA检测富集后的效果 | 第35-36页 |
| ·特异性单链抗体的鉴定 | 第36-38页 |
| ·特异性单链抗体在大肠杆菌中的分泌表达 | 第36页 |
| ·表达产物的ELISA鉴定 | 第36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第36-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-46页 |
| ·总RNA提取结果 | 第38页 |
| ·重链可变区PCR结果检测 | 第38-39页 |
| ·轻链可变区PCR结果检测 | 第39页 |
| ·BALB/C小鼠的ScFv基因的检测 | 第39-40页 |
| ·ScFv基因的PCR鉴定 | 第40页 |
| ·ScFv基因的单酶切鉴定 | 第40页 |
| ·ScFv基因多样性的单酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·ScFv基因的序列比对分析 | 第41-42页 |
| ·ScFv基因与PCANTAB-5E载体连接的双酶切鉴定 | 第42页 |
| ·ScFv基因与PCANTAB-5E载体连接的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·噬菌体展示抗体库滴度测定结果 | 第43页 |
| ·噬菌体抗体库的富集筛选结果 | 第43页 |
| ·筛选后噬菌体抗体库阳性克隆的ELISA检测结果 | 第43-44页 |
| ·筛选的特异性单链抗体的分泌表达后的ELISA检测结果 | 第44-45页 |
| ·筛选的特异性单链抗体的分泌表达结果 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-52页 |
| ·RNA提取 | 第46页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第46-47页 |
| ·轻链、重链的引物设计及扩增 | 第47页 |
| ·ScFv的构建 | 第47-48页 |
| ·Bstn I酶切鉴定ScFv基因的多样性 | 第48页 |
| ·克隆载体与ScFv基因的连接 | 第48页 |
| ·噬菌体载体的选择 | 第48-49页 |
| ·噬菌体PCANTAB-5E载体与ScFv基因的酶切位点的选择 | 第49页 |
| ·筛选过程中的问题 | 第49-50页 |
| ·噬菌体抗体库的构建方法 | 第50页 |
| ·特异性单链抗体的分泌表达 | 第50-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录A 主要试剂的配制 | 第60-63页 |
| 附录B 载体图谱 | 第63-64页 |
| 附录C 碱基序列分析 | 第64-68页 |
| 附录D 天然鼠源噬菌体抗体库单链抗体基因测序图 | 第68-71页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
