| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| ·植物病毒及其防治和利用 | 第11-12页 |
| ·植物病毒的发现 | 第11页 |
| ·植物病毒的类型及感染症状 | 第11-12页 |
| ·植物病毒对植物的侵染途径 | 第12页 |
| ·植物病毒在基因工程中的应用 | 第12页 |
| ·烟草花叶病毒的生物学特征 | 第12-14页 |
| ·烟草普通花叶病毒的特性 | 第12-13页 |
| ·烟草普通花叶病毒株系划分 | 第13-14页 |
| ·国内外防治烟草病毒的研究现状 | 第14-15页 |
| ·烟草抗花叶病毒病品种的选育及应用 | 第14-15页 |
| ·栽培措施防治烟草花叶病毒病 | 第15页 |
| ·药剂防治烟草花叶病毒病 | 第15页 |
| ·基因工程技术在烟草抗TMV 中的应用研究 | 第15-18页 |
| ·病毒外壳蛋白基因及其应用 | 第15-16页 |
| ·病毒复制酶基因及其应用 | 第16-17页 |
| ·病毒卫星RNA 的利用 | 第17-18页 |
| ·反义RNA 介导的抗病毒特性 | 第18页 |
| ·缺陷型运动蛋白介导的抗病毒 | 第18页 |
| ·RNAI 技术在防治病毒病害中的应用 | 第18-22页 |
| ·RNA 干涉机制 | 第19-20页 |
| ·RNA 干涉特点 | 第20-22页 |
| ·课题主要研究内容及研究目的和意义 | 第22-26页 |
| ·主要研究内容 | 第22-23页 |
| ·项目研究的目的和意义 | 第23-26页 |
| 第二章 RNAI 靶向基因（TMV 复制酶基因）中靶序列的获得 | 第26-34页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·耗材 | 第26页 |
| ·仪器 | 第26-27页 |
| ·试验内容 | 第27-30页 |
| ·RNAi 靶向基因的目的序列分离 | 第27-28页 |
| ·TMV 复制酶基目的靶序列的克隆 | 第28-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-34页 |
| ·RNAi 靶向基因靶序列的分离产物PCR 检测 | 第30页 |
| ·含TMV-r 基因片段重组子PCR 检测及测序鉴定 | 第30-34页 |
| 第三章 含靶序列反向重复结构的RNAI 双元载体系统构建 | 第34-44页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·耗材 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·试验内容 | 第34-39页 |
| ·构建含靶序列反向重复结构的pUCCRNAi 中间载体 | 第34-36页 |
| ·构建含靶序列反向重复结构的pC2300-35S-OCS-TMV 表达载体 | 第36-38页 |
| ·含靶序列反向重复结构的RNAi 双元载体系统构建 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·pUCCRNAi-TMV1（正向连接）载体构建 | 第39-40页 |
| ·pUCCRNAi-TMV2（反向连接）载体构建 | 第40-41页 |
| ·含靶序列反向重复结构的pC2300-35S-OCS-TMV 表达载体构建 | 第41-42页 |
| ·pC2300-35S-OCS-TMV 表达载体转化根癌农杆菌构建双元载体系统 | 第42-44页 |
| 第四章 根癌农杆菌介导的RNAI 嵌合基因在烟草中遗传转化 | 第44-54页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·耗材 | 第44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| ·试验内容 | 第44-48页 |
| ·工程菌对烟草组培苗的遗传转化及转基因烟草培育 | 第44-46页 |
| ·RNAi 转基因烟草的抗性鉴定 | 第46-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-54页 |
| ·转化烟草的PCR 检测 | 第48-50页 |
| ·转基因烟草人工接毒后抗病毒能力验证 | 第50-51页 |
| ·RNAi 效果的荧光定量分析 | 第51-53页 |
| ·转基因烟草中外源基因遗传特性 | 第53-54页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第54-60页 |
| ·结论 | 第54-55页 |
| ·TMV 复制酶基因部分DNA 序列的获得 | 第54页 |
| ·双元载体的构建 | 第54页 |
| ·双元载体系统侵染烟草无菌实生苗 | 第54页 |
| ·转化烟草的PCR 检测及抗性鉴定 | 第54-55页 |
| ·转化烟草RNA 干涉效果的荧光定量分析 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-60页 |
| ·关于RNA 干涉介导的基因沉默 | 第55-56页 |
| ·关于RNA 干涉中siRNA 的获得 | 第56页 |
| ·重组质粒中反向重复结构的PCR 鉴定 | 第56-57页 |
| ·RNA 干涉载体中反向重复序列的验证 | 第57页 |
| ·农杆菌介导的烟草基因转化的影响因素 | 第57-58页 |
| ·转基因材料的检测与鉴定 | 第58页 |
| ·转化材料田间接种 TMV 抗病性鉴定 | 第58-59页 |
| ·转化材料中外源基因表达差异 | 第59页 |
| ·RNA 干涉的发展及应用 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67-68页 |
| 版图及版图说明 | 第68-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 个人简历 | 第74页 |
