| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-40页 |
| ·植物根结线虫生物防治研究进展 | 第12-15页 |
| ·植物根结线虫概述 | 第12页 |
| ·植物根结线虫的生物防治 | 第12-14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌防治植物寄生线虫的研究进展 | 第14-15页 |
| ·苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白 | 第15-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第15-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因 | 第16-26页 |
| ·质粒 | 第26-33页 |
| ·质粒的拷贝数 | 第26-27页 |
| ·质粒的复制 | 第27-31页 |
| ·质粒复制的调节 | 第31-32页 |
| ·质粒的不相容性 | 第32页 |
| ·质粒的稳定性 | 第32-33页 |
| ·质粒的转移 | 第33页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒研究进展 | 第33-39页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的分类 | 第33-34页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的功能研究 | 第34-36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒基因组的研究 | 第36-39页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| 2 材料和方法 | 第40-55页 |
| ·试剂和仪器 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·菌株和材料 | 第40-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第40-43页 |
| ·本研究所用培养基配方 | 第43页 |
| ·细菌质粒的制备和DNA操作 | 第43-45页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的提取 | 第43页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第43页 |
| ·质粒DNA的纯化和脱盐 | 第43-44页 |
| ·PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·其它DNA操作 | 第45页 |
| ·转化 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌的电转化 | 第45-46页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第46页 |
| ·显微镜观察 | 第46页 |
| ·Southern杂交 | 第46-48页 |
| ·转膜 | 第46-47页 |
| ·杂交 | 第47-48页 |
| ·斑点杂交 | 第48页 |
| ·晶体蛋白的纯化和SDS-PAGE检测 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE样品的制备 | 第48-49页 |
| ·晶体蛋白的纯化 | 第49页 |
| ·晶体蛋白的SDS-PAGE检测 | 第49页 |
| ·Western blot | 第49-50页 |
| ·抗体的制备 | 第49-50页 |
| ·Western blot | 第50页 |
| ·序列分析 | 第50-51页 |
| ·DNA的测序和序列分析 | 第50页 |
| ·蛋白序列的分析 | 第50-51页 |
| ·苏云金芽胞杆菌BAC文库的构建 | 第51-53页 |
| ·BAC载体的制备 | 第51页 |
| ·苏云金芽胞杆菌大片段DNA的制备 | 第51-52页 |
| ·转化和文库的保存 | 第52-53页 |
| ·根结线虫生物活性的测定 | 第53页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒稳定性检测 | 第53页 |
| ·质粒的接合转移 | 第53-55页 |
| 3 结果和分析 | 第55-93页 |
| ·杀线虫晶体蛋白基因cry55Aa1、cry6Aa2以及cry5Ba2的克隆 | 第55-64页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1518总DNA的BAC文库的构建 | 第55页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1518质粒DNA文库的构建 | 第55-57页 |
| ·能够产生晶体的重组子的筛选 | 第57-58页 |
| ·晶体蛋白基因cry55Aa1、cry6Aa2以及cry5Ba2的分离 | 第58-61页 |
| ·晶体蛋白基因cry55Aa1和cry6Aa2的定位 | 第61-63页 |
| ·晶体蛋白对北方根结线虫的生物活性测定 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64页 |
| ·质粒pBMB0228的序列分析 | 第64-78页 |
| ·质粒pBMB0228的注释 | 第65-68页 |
| ·Cry蛋白以及Cry类似编码序列的分析 | 第68-70页 |
| ·复制区序列解析 | 第70-75页 |
| ·接合转移功能相关序列分析 | 第75-77页 |
| ·IS序列分析 | 第77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| ·质粒pBMB0228的功能验证 | 第78-87页 |
| ·基因cry55Aa1和cry6Aa2在菌株BMB171中的共表达 | 第78-79页 |
| ·复制蛋白功能验证 | 第79-82页 |
| ·重组质粒稳定性的检测 | 第82-84页 |
| ·Mob蛋白功能验证 | 第84-85页 |
| ·Cry6A-like以及R2-like蛋白形成晶体情况的检测 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| ·基因cry5Ba2在菌株YBT-1518中隐蔽机制的初步研究 | 第87-92页 |
| ·Cry5Ba2蛋白在菌株YBT-1518的Western blot检测 | 第87-88页 |
| ·基因cry5Ba2在菌株YBT-1518中的定位 | 第88页 |
| ·晶体蛋白基因cry55Aa1和cry6Aa2的表达对基因cry5Ba2的影响 | 第88-90页 |
| ·基因cry5Ba2的侧翼序列对其表达的影响 | 第90-92页 |
| ·小结 | 第92页 |
| ·几株苏云金芽胞杆菌BAC文库的构建 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-96页 |
| 5 总结 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 附录A 本研究所用工具载体的物理图谱 | 第116-118页 |
| 附录B 发表论文和申请专利 | 第118页 |
